Estudo de proteinas mitocondriais envolvidas em processos de transdução de energia em plantas

Orientador: Ione Salgado MartinsTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: No presente trabalho foi utilizado 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP para identificar a proteína desacopladora (PUMP) presente em mitocôndrias de tubérculos de batata. Um sítio para a ligação de nucleotídeos, distinto daquele presente no translocador de ADP/ATP, foi caracterizado. Este sítio de ligação de nucleotídeos de adenina se mostrou sensível ao GTP, apresentando uma constante de dissociação para 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP de 21 'mu¿M, com ligação máxima em pH baixo. A sensibilidade ao GTP e a dependência ao pH, do sítio de ligação para nucleotídeos de adenina, identificado em mitocôndrias de tubérculos de batata, não foi detectada em mitocôndrias de fígado de rato, mas se assemelha ao presente na proteína desacopladora de mitocôndrias do tecido adiposo marrom. O marcador 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP foi covalentemente incorporado em mitocôndrias de tubérculos de batata através de irradiação ultravioleta. Duas bandas principais de 30 e 32 Kda foram identificadas na auto-radiografia do gel eletroforético em SDS das proteínas mitocondriais. Estas bandas correspondem ao translocador de ADP/ATP e à PUMP, uma vez que não ocorreu na presença de carboxiatractilosídeo (CAT) ou , respectivamente, que são ligantes destas proteínas. O presente trabalho também verificou se o translocador de ADP/ATP, além da PUMP, participa do desacoplamento de mitocôndrias de batata, mediado por ácidos graxos livres (AGL)... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digitalAbstract: In the present work we used 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP to identify the uncoupling protein of potato tuber mitochondria (PUMP). An adenine binding site is described which is distinct from the one present in the ADP/ATP translocator. This adenine nucleotide binding site is sensitive to GTP with a dissociation constant for 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP of 21 'mu¿M and an optimum at acidic ph. The GTP sensitivity and pH dependence of the adenine nucleotide binding site, detected in potato tuber mitochondria, was not apparent in rat liver mitochondria, and closely corresponds to the uncoupling mitochondrial protein of brown adipose tissue mitochondria. The probe 8-azido['alfa POT. 32¿P]ATP was covalently incorporated into potato tuber mitochondria by near ultraviolet irradiation. Two major radioactive bands of 30 and 32 Kda were identified in the autoradiography of the SDS gel electrophoresis of potato mitochondrial proteins. These bands correspond to the ADP/ATP translocator and PUMP, since labeling was prevented by carboxyatractyloside (CAT) of GTP, ligands of these proteins, respectively. The present work also examined whether the ADP/ATP translocator, other than PUMP, participates in free fatty acid (FFA)-mediated uncoupling of potato tuber mitochondria. The basal respiration rate of succinate-energized mitochondria was stimulated by a low concentration of palmitate... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertationsDoutoradoDoutor em Ciências Biológica