Produção, purificação e caracterização bioquimica de lipase de uma nova linhagem de Rhizopus Sp.

Orientador: Glaucia Maria PastoreDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de AlimentosResumo: Nas últimas décadas as Indústrias de Alimentos e Farmacêutica, têm demonstrado grande interesse na aplicação potencial de lipases de diferentes fontes como as de origem animal, as lipases de plantas e especialmente as lipases microbianas por sua capacidade de produção e especificidade. Deste modo, este trabalho teve como objetivo caracterizar bioquimicamente uma lipase fúngica de uma linhagem de Rhizopus ainda não relatada na literatura. A lipase de Rhizopus sp. linhagem n° 14, isolado no laboratório de Bioquímica de Alimentos do Departamento de Ciências de Alimentos (FEA/UNICAMP), foi produzida em meio semi-sólido constituído de farelo de trigo e água na proporção 60 / 40 (p/v). Esta linhagem foi escolhida por ter sido a que melhor produziu a enzima neste meio de fermentação. O extrato enzimático bruto ou lipase bruta foi extraído do meio após 120 horas de incubação a 30°C, por precipitação em sulfato de amônio. A atividade lipolítica foi testada contra os substratos gordura de côco, óleo de oliva, óleo de mamona, gordura do leite de cabra e o substrato sintético p-nitrofenil-laurato. A enzima mostrou maior atividade para hidrolisar gordura de côco, frente aos outros substratos. O extrato enzimático bruto foi parcialmente purificado em coluna de DEAE-Sephadex A-50, sendo obtidas duas frações, as quais foram submetidas a testes bioquímicos para a caracterização de suas propriedades em substrato sintético p-nitrofenil-laurato. As frações apresentaram um perfil de atividade em temperatura na faixa de 40 a 55°C e temperatura de estabilidade na faixa de 24 a 40°C, e, pH ótimo de 6,0 a 6,5 e mostraram-se estáveis na faixa de pH de 5,6 a 7,5, semelhante a enzima bruta.Abstract: Interest on lipases from different sources (microorganisms, animals and plants), has markedly increased in the last decade due to the potential applications of lipases in Food and Pharmaceutical Industries. The objective of this work was to characterize the biochemical from the lipase of Rhizopus sp fungal. These lipase has not still reported. The lipase from Rhizopus sp,strain n.O 14, isolated in the Food Biochemistry Laboratory (DCA/ FEA/ UNICAMP),was produced in a solid state medium, wich consited of 60% wheat bran and 40% water. This strain was selected based on high activity of extracelular lipase in the broth. The cru de enzyme extract was obtained from the culture medium after 120 hours incubation at 30°C. The lipolytic activity was tested using as substrate cocconut fat, olive oil, castor oil, goat' s milk fat and p-nitrophenylaurate synthetic substrat. The enzyme demonstrated the highest activity on hydrolyzed coconut fat as compared to others substrates. The crude enzyme extract was purified on DEAE-Sephadex A-50 column. two fractions were obtained. These fractions were submitted to biochemical tests to characterize their properties on p-nitrophenylaurate synthetic substrate. The fractions presented activity in the range of 40°C to 55°C and thermostability in the range of 24 'DEGREE'C to 40 'DEGREE'C. Optimum pH of the enzymes was 6,5 - 7,5. It showed to be stable in pH's of 5,6- 7,5. These data were similar in the crude enzyme.MestradoMestre em Ciência da Nutriçã