Atuação do WEB2086 como inibidor da ação do fator de ativação plaquetaria (PAF) em ratos Wistar submetidos a isquemia hepatica seletiva normotermica e reperfusão

Orientador: Orlando Castro e Silva JrTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A oc1usão vascular temporária do fluxo hepático é um dos procedimentos essenciais na cirurgia hepática. A reperfusão do tecido hepático isquêmico está associada à distúrbios circulatórios sistêmicos e aumento da permeabilidade vascular, edema, desarranjo estrutural hepatocelular, podendo, na dependência do tempo de isquemia ocorrer morte celular. Isto acontece devido à geração de mediadores inflamatórios como o fator de ativação plaquetária (PAF). O objetivo deste trabalho foi verificar a efetividade do WEB 2086, .como protetor das lesões oriundas da liberação do P AF, após 60 e 90 minutos de isquemia hepática seletiva normotérmica e 60 minutos de reperfusão. F oram usados 192 ratos Wistar para estudo da avaliação bioquímica sérica pelas dosagens de AST, ALT e DHLs Avaliou-se a função mitocondrial (consumo de O2 nos estados lU e IV da respiração mitocondrial e a relação E UI/E IV = razão de controle respiratório (RCR), a lipoperoxidação do conteúdo hepático (glutationa e malondialdeído) e realizou-se a análise histológica das biópsias hepáticas. Outros 48 ratos foram usados para avaliação hemo dinâmica. Os animais foram submetidos à isquemia hepática seletiva normotérmica por pinçamento do pedículo vascular dos lobos mediano e lateral esquerdo. Os animais foram distribuídos em dois grupos. Os animais do, grupo A receberam soro fisiológico cinco minutos antes da isquemia e os do grupo B" receberam WEB 2086 (10 mg/kg peso corpóreo). Os animais dos subgrupos isquêmicos de 60 minutos foram A2 e B2 e seus subgrupos controle foram AI e B 1. Os dos subgrupos isquêmicos de 90 minutos foram A4 e B4 e seus subgrupos controle foram A3 e B3. O estudo foi realizado no início do experimento (C), pré-reperfusão (RO), após 15 (RI5) minutos e 60 (R60) minutos da reperfusão. Observou-se que as dosagens das enzimas AST, ALT e DHLs foram elevadas após a reperfusão em todos os subgrupos isquêmicos. Os valores do E lU foram maiores no subgrupo isquêmico B2 em relação ao subgrupo A2 (RI5) e no E IV esta diferença foi observada aos 15 e 60 minutos da reperfusão. A RCR dos subgrupos isquêmicos A2 e A4 foi menor do que a de seus subgrupos controle (RO). Os valores de malondialdeído (MDA) do subgrupo isquêmico A4 foi maior após 15 minutos de reperfusão do que no período isquêmico. Os valores da glutationa (GSH) do subgrupo isquêmico B4 foi maior que a do subgrupo A4 (R15). O grau de congestão hepática foi maior nos subgrupos isquêmicos em relação aos subgrupos controle após o início da reperfusão. O gFau da vacuolização citoplasmática dos subgrupo B4 e B2 foi maior que a dos subgrupos A4 (RO) e Bl(R15).Os valores da pressão arterial média do subgrupo A4 foram menores que a dos subgrupos B4 e A3 aos 15 minutos de reperfusão. Os valores da pressão venosa central do subgrupo B4 foram maiores que os do subgrupo A4. Concluiu-se que a droga WEB 2086 inibiu o efeito hipotensor do fator de ativação plaquetária (P AF) e a lipoperoxidação do conteúdo mitocondrial ocorridos nos animais submetidos a 90 minutos de isquemia e 15 minutos de reperfusãoAbstract: Temporary hepatic inflow occlusion is one of the essential procedures during liver surgery and liver transplantation. Reperfusion of ischemic tissues is associated with a variety of microvascular changes, including endothelial cell swelling, increased vascular permeability and other alterations in the liver function tests. The platelet-activating factor (P AF) is an endogenous lipid-mediator that catalyses various inflammatory processes. It has been shown to be involved in tissue injury after ischemia/reperfusion, when ftee radicals were released. The aim of this study was to verify, in Wistar rats, the effectiveness of WEB 2086 (P AF antagonist), on preventing the alterations caused by warm partial liver ischemia by clamping the hilar area of the left lateral and medial hepatic lobes during 60 and 90 minutes followed by zero, lS and 60 minutes of reperfusion. The study was conducted on 192 male Wistar rats which were divided into two groups. Group A used saline solution and group B used WEB 2086 (10 mg/Kg body weight) tive minutes before clamping. No intestinal congestion occurred with this maneuver. The control gioups which were submitted to 60 minutes ofliver ischemia, were AI and Bl, and the control groups which were submitted to 90 minutes were A3 and B3. The ischemic groups of 60 minutes were A2 and B2 and the ischemic groups of 90 minutes ' were A4 and B4. Before and after the ischemia (C and RO) and IS and 60 minutes after the reperfusion (RIS and R60), the plasma AST, ALT, DHLs, and liver mitochondrial function (m state, IV state and the ratio IIIIIV=RCR), liver reduced glutathione and (GSH) and alondialdehyde (MDA) and histology analyses were performed. Another 48 animals were submitted to the same procedure and in these rats hemodynamic alterations (medial arterial pressureIMAP and central venous pressure/CVP) were studied. AST, ALT and DHLs, were markedly increased after reperfusion in ali the animals.State lU values were more elevated in group B2 than A2 (RIS). The same difference occured in IV state (RIS and R60). The group A2 and A4 showed reduced RCR in comparison to the non-ischemic controls. MDA levels were not different between alI the groups, but the GSH levels were seen to be elevated in the group B4 vs A4 after reperfusion (RIS). The same results were observed in MAP. CVP levels were increased in group B4 Vs A4. All groups showed light cell necrosis, cell congestion, reduced neutrophils: and vacuolization of the midzonal areas of the lobules main1y after reperfusion. In conc1usion, after 90 minutes of warm ischaemia, WEB 2086 increased GSH levels after reperfusion and medial arterial pressure after 15 minutes of reperfusion. This suggests that warm ischaemia injury is related to the generation of P AF and WEB 2086 was most effective in inhibiting hypotension and lipid peroxid in this oxidative stressDoutoradoDoutor em Cirurgi