Estudos bioquimicos e fisicos de hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus (Oligochaeta)

Orientadores : Nilce Correa Meirelles, Iris Linares de TorrianiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Glossoscolex pauHstus (Oligochaeta, Glossoscolecidae) é um anelídeo que vive no solo em regiões calcáreas no Estado de São Paulo, e tem uma hemeproteína gigante extracelular que ocorre dissolvida no sangue. Esse tipo de pigmento respiratório é denominado eritrocruorina, e é observado à microscopia eletrônica como dois discos hexagonais sobrepostos, cada um contendo seis subunidades, com uma cavidade central. No presente trabalho estudou-se afinidade da eritrocruorina pelo oxigênio em presença do cátion bivalente magnésio, observando-se aumento de afinidade e cooperatividade. Determinou-se o coeficiente de sedimentação de 58 S, e estimou-se o peso molecular de 3,23 x 106 Da. Encontrou-se peso molecular mínimo de 25250 Da, alto comparativamente ao das hemoglobinas tetraméricas e mioglobinas, sugerindo a presença de subunidades que não carreiam o heme, a exemplo de outras eritrocruorinas. A abordagem com espalhamento de raios X a baixo ângulo levou a parâmetros estruturais de baixa resolução com raio de giro de cerca de 11,4 nm e dimensão máxima da moléculaAbstract: Glossoscolex paulistus (Oligochaeta, Glossoscolecidae) is an earthworm which dwells in limestone regions in São Paulo State, and has a giant extracellular hemeprotein that occurs in the blood. This type of respiratory pigment is called erythrocruorin, and is examined with the aid of electronic microscopy as two hexagonal superimposed disks, each one having six subunits and a central cavity. This thesis studies the affinity of erythrocruorin with oxygen in the presence of the divalent cation magnesium: an increase of affinity and cooperativity is observed. The sedimentation coefficient was found to be 58 S, and the molecular weight approximately 3.23 x 106 Da. The minimum molecular weight determined, 25,250 Da, was relatively high compared with those of tetrameric hemoglobins and mioglobins, thus suggesting the presence of subunits not carrying a heme group as is the case with other erithrocruorins. Small angle X-ray scattering experiments led to the determination of low resolution dimensional parameters such as the radius of giration (11.4 nm) and maximum molecular dimension (27 nm)MestradoBioquimicaMestre em Ciências Biológica