Le Parmigiano Reggiano : évolution de la microflore lactique cultivable et totale et des activités peptidasiques pendant la fabrication et l'affinage

Parmigiano Reggiano is a Protected Designation of Origin, long-ripened cheese, made from cow's milk supplemented with natural whey starter, which thus contains a large microbial biodiversity. The aim of this study was to understand the population dynamics of the total lactic microflora throughout the manufacture and ripening of this cheese. Several approaches were combined to determine the quantitative changes in the different bacterial populations during 20 months of ripening of Parmigiano Reggiano cheeses from the same cheesemaking. Total and viable cells were enumerated after fluorescent labeling. Culturable bacteria were enumerated on different plate count agar media, including original media prepared from curd and ripened cheese. Six peptidase activities were quantified in curd and cheese samples free from cells. While the total bacterial cultivable population remained high and similar for the first six months, a decrease in viable starter lactic acid bacteria was observed during the first 48 h. The non-starter lactic acid bacteria populations, initially present in low numbers, began to grow after the brining and remained at high levels (about 10$^{7 }$ CFU$\cdot $g$^{-1})$ for at least 10 months. During ripening, a strong decrease in the total bacterial population and a marked increase in 4 out of 6 peptidase activities were observed. In the external and internal zones of Parmigiano Reggiano cheese different trends in microbial growth, cell autolysis and peptidase activity were observed. This study gives for the first time a global view of the possible contribution of total, viable, cultivable and lysed bacterial cells throughout the ripening of Parmigiano Reggiano cheese.Le Parmigiano Reggiano est un fromage d'Appellation d'Origine Protégée à affinage long, fabriqué à partir de lait cru supplémenté d'un levain naturel issu du lactosérum. Ce fromage contient, en conséquence, une large biodiversité microbienne. L'objectif de cette étude était de comprendre la dynamique de population de la microflore lactique pendant la fabrication et l'affinage du Parmigiano Reggiano. Plusieurs approches ont été combinées pour déterminer l'évolution des différentes populations bactériennes dans ce fromage au cours de 20 mois d'affinage de fromages issus de la même série de fabrications. Le nombre de bactéries totales et viables a été mesuré après marquage fluorescent. Les bactéries cultivables ont été déterminées en utilisant différents milieux gélosés, incluant des milieux originaux préparés à partir de caillé et de fromage affiné. Six activités peptidasiques ont été quantifiées dans des échantillons de caillé et de fromages exempts de cellules bactériennes. La population de bactéries viables diminuait dans le caillé pendant les 48 premières heures, alors que la population totale de bactéries cultivables restait élevée et constante sur les six premiers mois d'affinage. Les populations de bactéries lactiques non levains, présentes initialement en faible nombre, commençaient à se développer dès le saumurage puis restaient à un niveau élevé (environ 10$^{7 }$ UFC$\cdot $g$^{-1})$ pendant plus de 10 mois. Une forte chute de la population bactérienne totale était observée peandant l'affinage, accompagnée d'une hausse marquée de 4 activités peptidasiques. Dans les parties externes et internes du Parmigiano Reggiano, différentes tendances de croissance, d'autolyse et d'activité peptidasique étaient observées. Cette étude donne pour la première fois un aperçu global de la contribution possible des populations totales, viables, cultivables et lysées tout au long de l'affinage du Parmigiano Reggiano