Note de laboratoire : Dosage rapide et spécifique du lévétiracétam (Keppra®) par HPLC/MS

Une méthode originale par HPLC/MS est proposée pour l'identification formelle et le dosage du lévétiracétam (LEV ; Keppra®), un nouvel antiépileptique, dans les fluides biologiques. Après micro-extraction en phase liquide de 100 µl d'échantillon par le chloroforme/2-propanol/n-heptane (25 : 10 : 65, v/v) à pH 9,5 en utilisant le prazépam comme standard interne (SI), la séparation s'effectue sur colonne Waters NovaPak C18 (150 x 2,0 mm, i.d.) à l'aide d'un gradient acétonitrile/tampon 2 mM NH4COOH, pH 3,0. La détection est assurée par le spectromètre de masse API-100 (Perkin-Elmer) avec interface à pression atmosphérique de type ionspray utilisée en mode d'ions positifs ; l'acquisition se fait en courant ionique total ou en SIM à m/z 171,0 ; 154,0 et 126,0 (LEV); et 325,0 (SI). Les temps de rétention moyens du LEV et du SI sont respectivement de 3,60 ± 0,12 min et 8,09 ± 0,27 min ; l'ensemble de la procédure d'analyse nécessite moins de 45 min. Les limites de détection pour le LEV sont comprises entre 150 et 200 μg/l, la limite de quantification est de 500 μ/l dans le sang total, le plasma ou l'urine. La méthode est simple, rapide, sensible et d'une très grande spécificité; elle est appropriée non seulement aux dosages à visée médico-légale mais aussi au monitoring thérapeutique ou à la toxicologie d'urgence. Une application clinique est présentée avec le cas d'un sujet de 66 ans supposé victime d'un surdosage en Keppra®, chez lequel la procédure décrite a permis de caractériser un taux plasmatique à 199,5 mg/l et un taux urinaire à 413,7 mg/l