Efeito do hormônio folículo estimulante (FSH) e da melatonina sobre o cultivo e a maturação in vitro de folículos ovarianos pré-antrais e antrais

O efeito do hormônio folículo estimulante recombinante humano (rhFSH) e da melatonina sobre cultivo e a maturação in vitro de folículos ovinos foi avaliado. Este trabalho foi divido em 3 Capítulos. Capítulo I: Folículos secundários foram cultivados em α-MEM+ (controle) ou adicionado de diferentes concentrações fixas (500, 750 e 1000 ng/mL) ou concentrações sequenciais de rhFSH (Seq. 1 e Seq 2). Folículos secundários (Capítulo II) e antrais iniciais (Capítulo III) foram cultivados utilizando diferentes concentrações fixas da melatonina (Mel 100, Mel 500 ou Mel 1000 pg/mL) ou uma concentração sequencial (Mel Seq). Cap.I: a sobrevivência folicular foi maior em rhFSH 750 ng/mL do que em α-MEM+ e 1000 ng/mL. A adição de rhFSH ao meio promoveu um aumento significativo na percentagem de oócitos totalmente crescidos em todos os tratamentos em comparação ao α-MEM+. A atividade mitocondrial foi maior nos tratamentos com rhFSH do que o controle, exceto o rhFSH Seq. 2. Após a MIV, oócitos de folículos intactos cultivados em rhFSH 750 ng/mL apresentaram um aumento significativo na porcentagem de maturação em comparação ao α-MEM+. Cap.II: Mel 500 pg/mL e Mel 1000 pg/mL apresentaram uma taxa de oócitos totalmente crescidos significativamente maior do que os outros tratamentos. Após a MIV, os níveis de ERO foram menores em Mel 1000 pg/mL em comparação aos demais tratamentos. Cap III: Mel 500 pg/mL apresentou maior taxa de oócitos totalmente crescidos in vitro que os outros tratamentos. Após o CIV, os níveis de ERO no oócito foram semelhantes entre Mel 500 pg/mL e MelSeq, sendo ambos menores que os demais tratamentos. A atividade mitocondrial foi similar entre os tratamentos controle, Mel 500 e 1000 pg/mL. Mel 500 pg/mL apresentou uma porcentagem maior de oócitos GVBD do que o grupo controle e percentuais similares aos demais. Folículos cultivados em melatonina seguida de maturação oocitária com adição de 500 pg/mL de melatonina no meio de MIV apresentaram aumento da atividade mitocondrial do que α-MEM+. Conclusões gerais: Após os resultados obtidos, pode-se inferir que utilizando um meio definido, o FSH na concentração de 750 ng/mL mantém a sobrevivência folicular e promove o aumento dos níveis de mitocôndrias ativas, do crescimento e melhora a maturação oocitária. Além disso, foi possível demonstrar que a melatonina no cultivo de folículos pré-antrais e antrais iniciais pode aumentar os níveis energéticos dos oócitos, reduzir a produção de espécies reativas de oxigênio e favorecer a obtenção de oócitos com tamanho apropriado para a maturação in vitro.The effect of human recombinant follicle stimulating hormone (rhFSH) and melatonin on culture and in vitro maturation of ovine follicles was evaluated. This work was divided into 3 Chapters. Chapter I: Secondary follicles were cultured in α-MEM+ (control) or added at different fixed concentrations (500, 750 and 1000 ng/mL) or sequential concentrations of rhFSH (Seq.1 and Seq.2). Secondary follicles (Chapter II) and initial anthraxes (Chapter III) were cultured using different fixed concentrations of melatonin (Mel 100, Mel 500 or Mel 1000 pg/mL) or a sequential concentration (Mel Seq). Cap.I: follicular survival was higher in rhFSH 750 ng/mL than in α-MEM+ and 1000 ng/mL. The addition of rhFSH in the medium promoted a significant increase in the percentage of fully grown oocytes in all treatments compared to α-MEM+. Mitochondrial activity was higher in rhFSH treatments than control, except rhFSH Seq. 2. Following IVM, intact follicular oocytes cultured in rhFSH 750 ng/mL showed a significant increase in maturation percentage compared to α-MEM+. Cap.II: Mel 500 pg/mL and Mel 1000 pg/mL showed a significantly higher rate of fully grown oocytes than the other treatments. After the IVM, ERO levels were lower in Mel 1000 pg / mL compared to the other treatments. Cap III: Honey 500 pg/mL presented higher rate of fully grown oocytes in vitro than the other treatments. After IVC, the levels of ROS in the oocyte were similar between Mel 500 pg/mL and MelSeq, both being lower than the other treatments. Mitochondrial activity was similar between control treatments, Mel 500 and 1000 pg/mL. Mel 500 pg/mL presented a higher percentage of GVBD oocytes than the control group and percentages similar to the others. Follicles cultured in melatonin followed by oocyte maturation with addition of 500 pg/mL melatonin in the IVM medium showed increased mitochondrial activity than α-MEM+. After the results obtained, it can be inferred that using a defined medium, FSH at a concentration of 750 ng/mL maintains follicular survival and promotes an increase in active mitochondria levels, growth and improvement of oocyte maturation. In addition, it was possible to demonstrate that melatonin in the culture of preantral and antral follicles can increase oocyte energetic levels, reduce the production of reactive oxygen species and favor the production of oocytes of appropriate size for in vitro maturation