Formação de biofilme e perfil de resistência a antimicrobianos e sanitizantes de Listeria monocytogenes isoladas de leite de tanques de expansão

Dentre os alimentos relacionados às doenças transmitidas por alimentos estão os lácteos, pois a qualidade do leite produzido em diversas regiões do Brasil ainda é insatisfatória, deixando-o sujeito a micro-organismos que afetam a produção leiteira e a saúde dos consumidores. Considera-se Listeria monocytogenes um sério problema na segurança de alimentos e diante da relevância da produção de leite no país e da obtenção de alimentos seguros, objetivou-se avaliar a formação de biofilme e o perfil de resistência a antimicrobianos e sanitizantes de Listeria monocytogenes isoladas de leite de tanques de expansão. As análises foram realizadas no Laboratório de Inspeção de Carne e Leite (LICAL) da UFRPE. Após isolamento e identificação a partir de características morfo-tintoriais e bioquímicas, colônias de L. monocytogenes foram submetidas a oito antimicrobianos, sendo estes penicilina G, ampicilina (10μg), cefalotina (30μg), cloranfenicol (30μg), ciprofloxacina (5μg), eritromicina (15μg), clindamicina (2μg) e tetraciclina (30μg), através do método de difusão em disco. Em seguida, realizou-se o teste de formação de biofilme utilizando-se placa de microdiluição de 96 poços e os isolados formadores de biofilme foram submetidos ao teste com os sanitizantes cloro a 2,5% e clorexidine a 2%. Detectou-se Listeria monocytogenes em 20% das amostras (6/30). Observou-se que 83,3% (5/6) e 16,6% (1/6) dos isolados apresentaram resistência e resistência intermediária a clindamicina, respectivamente e 16,6% (1/6) de resistência a cloranfenicol e eritromicina. 66,6% (4/6) dos isolados foram capazes de formar biofilme. Detectou-se ação mais eficaz do cloro em relação à capacidade de interferir nas células livres, pois em 50% (2/4) inibiu completamente a aderência e em 50% (2/4) a sua ação permitiu uma fraca aderência. O clorexidine permitiu aderência moderada em 100% dos isolados. Em relação ao biofilme consolidado o cloro foi 75% (3/4) mais eficaz na redução da aderência em relação ao clorexidine. Este trabalho foi pioneiro no isolamento de Listeria monocytogenes em leite proveniente de tanques de expansão individuais em municípios do estado de Alagoas. A ocorrência de Listeria monocytogenes nas amostras avaliadas representa um risco à saúde pública. A formação de biofilme e a resistência apresentada por estas cepas a produtos sanitizantes predispõem para a persistência deste micro-organismo na cadeia de produção de leite. Desta forma, faz-se necessário o monitoramento deste micro-organismo e da mastite no rebanho. Além disso, a realização de pré e pós-dipping de forma correta, a sanitização dos equipamentos e do tanque, a avaliação regular da eficiência dos sanitizantes utilizados e a coleta do leite pelo caminhão refrigerado no tempo adequado possuem relevância na garantia da qualidade do leite, sendo imprescindíveis para o fornecimento de alimentos seguros à população. A ocorrência de cepas resistentes a antimicrobianos pode comprometer o tratamento da listeriose humana. Evidencia-se a necessidade de realização de testes com antimicrobianos e de aderência periodicamente para monitoramento do perfil de resistência e da formação do biofilme por parte deste micro-organismo, com o intuito de promover o controle da Listeria monocytogenes no rebanho e de prevenir a contaminação do leite por micro-organismos patogênicos.Among foods related to foodborne diseases are dairy products, since the quality of milk produced in several regions of Brazil is still unsatisfactory, leaving it subject to microorganisms that affect milk production and consumer health. Listeria monocytogenes is considered a serious problem in food safety and due to the importance of milk production in the country and the obtaining of safe food, the objective to evaluate the biofilm formation and antimicrobial resistance profile and sanitizers of Listeria monocytogenes isolated from milk from expansion tanks. The analyzes were carried out at the Meat and Milk Inspection Laboratory (LICAL) of UFRPE. After isolation and identification from morpho-tinctorial and biochemical characteristics, L. monocytogenes colonies were submitted to eight antimicrobials: penicillin G (10U), ampicillin (10μg), cephalothin (30μg), chloramphenicol (30μg), ciprofloxacin 5μg), erythromycin (15μg), clindamycin (2μg) and tetracycline (30μg) by the disc diffusion method. Then, the biofilm formation test was performed using a 96-well microdilution plate and the biofilm forming isolates were tested with 2.5% chlorine sanitizers and 2% chlorhexidine. Listeria monocytogenes were detected in 20% of the samples (6/30). It was observed that 83.3% (5/6) and 16.6% (1/6) of the isolates presented resistance and intermediate resistance to clindamycin, respectively, and 16.6% (1/6) resistance to chloramphenicol and erythromycin. 66.6% (4/6) of the isolates were able to form biofilm. It was detected a more effective action of chlorine in relation to the ability to interfere in the free cells, because in 50% (2/4) it completely inhibited the adhesion and in 50% (2/4) its action allowed a poor adherence. Chlorhexidine allowed moderate adherence in 100% of the isolates. In relation to the consolidated biofilm, chlorine was 75% (3/4) more effective in reducing adherence to chlorhexidine. This work was pioneer in the isolation of Listeria monocytogenes in milk from the individual expansion tanks existing in the municipalities of Alagoas State. The occurrence of Listeria monocytogenes in the samples evaluated represents a risk to public health. The biofilm formation and the resistance presented by these strains to sanitizing products predispose to the persistence of this microorganism in the milk production chain. Thus, it is necessary to monitor this microorganism and mastitis in the herd. In addition, the correct pre and post-dipping, the sanitation of the equipment and the tank, the regular evaluation of the efficiency of the sanitizers used and the collection of the milk by the truck refrigerated in the appropriate time have relevance in the guarantee of milk quality, being essential for the provision of safe food to the population. The occurrence of antimicrobial resistant strains may compromise the treatment of human listeriosis. It is evidenced the need to carry out antimicrobial tests and adhesion periodically to monitor the profile of resistance and biofilm formation by this microorganism, in order to promote the control of Listeria monocytogenes in the herd and to prevent contamination of milk by pathogenic microorganisms.Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPE