Sexagem fetal em líquido amniótico ovino (Ovis aries L.,1758) por PCR

Com o objetivo de realizar a identificação do sexo fetal em ovinos, foram submetidas à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), 45 amostras de DNA extraídas do líquido amniótico de úteros prenhes, sendo 24 amostras de machos e 21, fêmeas. O fluido amniótico foi obtido por amniocentese guiada por ultra-sonografia para maior precisão na aspiração, como também para posterior aplicação in vivo da técnica, com efeito de simulação. A idade gestacional foi estipulada a partir da medição dos fetos com paquímetro, a qual apresentou variação de 3,3 a 46,5 cm. As amostras foram divididas em três grupos segundo Kadu e Kaikini (1987): Grupo 1 (zero a 8,6cm) da concepção ao 60o dia de gestação, Grupo 2 (8,7 a 26 cm) entre o 61o e o 105o dia e Grupo 3 (26,1 cm em diante) 106o até o nascimento. O DNA foi extraído através do método fenol-clorofórmio, obtendo-se uma quantidade inferior a 50 ngpor μl ao ser quantificado por comparação através de -lambda e visualizado em gel de agarose 1%. Na amplificação do material genético, foram utilizados os “primers” referentes aos genes SRY (116pb), encontrado no cromossomo Y presente apenas em machos, e Aml-X (300pb), de caráter autossômico, presente em ambos os sexos. Em todas as amostras foi possível realizar a sexagem fetal e os primers utilizados demonstraram ser bastante eficientes. O sexo foi confirmado pela análise morfológica dos fetos, com exceção do concepto cujo tubérculo genital ainda não havia migrado, comprovando a eficácia da ferramenta molecular PCR para este exame.In order to achieve the identification of sex in fetal sheep, were subjected to the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR), 45 samples of DNA extracted from amniotic fluid of pregnant uterus, 24 samples of males and 21 females. The amniotic fluid was obtained by amniocentesis guided by ultrasound for greater accuracy in aspiration and also for subsequent application of the technique in vivo, as simulation. Gestational age was laid on the measurement of fetuses with caliper, which showed variation of 3.3 to 46.5 cm. The samples were divided into three groups based in Kadu and Kaikini (1987): Group 1 (zero to 8.6 cm) from conception to the 60th day of gestation, group 2 (8.7 to 26 cm) among 61th and 105th day, and Group 3 (26,1 cm on) 106th day until the birth. The DNA was extracted using the method phenol-chloroform, obtaining a quantity of less than 50 ng per μL, quantified by comparing through - lambda and visualized in 1% agarose gel. For amplification of genetic material, were used "primers" to the SRY gene (116pb), found in the Y chromosome present only in males, and Aml-X (300pb), autosomal, present in both sexes. In all samples was possible to sex the fetuses and the primers used shown to be quite effective. The sex was confirmed by morphological analysis of fetuses, aside from the concept who genital tubercle still had not moved, proving the effectiveness of the PCR molecular tool for this examination.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPE