Criopreservação seminal de Tambaqui, Colossoma Macropomum

Tese(doutorado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Instituto de Oceanografia, 2011.A biotecnologia reprodutiva aplicada à aquicultura vem sendo incrementada com trabalhos de criopreservação seminal, melhoramento genético e produção de bancos de germoplasma. Durante a crioconservação de células espermáticas, podem ser utilizados diferentes crioprotetores internos e externos, curvas de resfriamento, ou formas de congelamento para minimizar o efeito deletério desta biotecnologia. O objetivo desta tese foi avaliar o efeito de diferentes crioprotetores sobre características das células espermáticas de tambaqui Colossoma macropomum observadas in vitro e in vivo. Os experimentos avaliaram Dimetilsulfoxido (DMSO) (5, 10, 15 e 20%); Dimetilformamida (DMF), dimetilacetamida (DMA) e Metilformamida (MF) (todas as amidas em 2, 5, 8 e 11%); Lipoproteína de baixa densidade (LDL) da gema do ovo de galinha (4, 8, 12 e 16%) assim como Trealose (50, 100, 150 e 200 mM), para crioproteção espermática de tambaqui. Após o sêmen ter sido congelado e descongelado, foi avaliada sua qualidade quanto às taxas de motilidade espermática, fertilização, eclosão, funcionalidade mitocondrial, integridade da membrana, integridade do DNA e ao tempo de latência. As taxas de fertilização e de eclosão com 10% DMSO não diferiram do sêmen fresco. Devido aos resultados obtidos com 10% de DMSO, este foi comparado com as amidas, LDL e Trealose. As maiores taxas de fertilização e eclosão ocorreram quando se utilizou amidas nas concentrações de 5% DMA, 8% DMF e 8% MF, as quais não diferiram entre si. Nesses tratamentos, as taxas de fertilização e eclosão foram semelhantes às observadas com sêmen fresco. As concentrações mais elevadas de LDL asseguraram a manutenção da integridade de membrana e da mitocôndria e promoveram maior viabilidade celular. Por outro lado, se obsevou que, quanto maiores as concentrações de LDL, menores foram o tempo de latência, as taxas de motilidade, fertilização e eclosão. As taxas de fertilização e eclosão não diferiram entre DMSO e os tratamentos que utilizaram trealose, sendo que a taxa da fertilização com 150 mM de trealose não diferiu do tratamento com sêmen fresco. Com estes resultados conclui-se que as amidas (5% DMA, 8% DMF e 8% MF) e 150 mM trealose preservaram de forma eficiente células espermáticas de Colossoma macropomum.The use of reproductive biotechniques in aquaculture has been incremented in studies focused on sperm cryopreservation, genetic improvement and germplasm production. Distinct penetrating and non penetrating cryoprotectants, cooling curves and other freezing methods can be used to minimize the potential deleterious effects for spermatozoa arising from the cryopreservation process. The objective of this thesis was to evaluate the effect of different cryprotectants on in vitro and in vivo characteristics of tambaqui, Colossoma macropomum, sperm. The experiments evaluated Dimethyl sulfoxide (DMSO) (5, 10, 15 and 20%); Dimethylformamide (DMF), Dimethylacetamide (DMA) and Methylformamide (MF) (all amides in 2, 5, 8 and 11%); Low density lipoprotein (LDL) from chicken egg yolk (4, 8, 12 and 16%) for as Trehalose (50, 100, 150 and 200 mM), for tambaqui sperm cryopreservation. The post-thawing sperm quality evaluations were: sperm motility, fertilization and hatching rates; mitochondrial functionality, integrity of sperm membrane and DNA and period of motility. The fertilization and hatching rates with 10% DMSO did not differ from fresh semen. Therefore, 10% DMSO was used as a control for comparisons against amides, LDL and Trehalose. The greatest fertilization and hatching rates were obtained with 5% DMA, 8% DMF and 8% MF, which not only did not differ among themselves, but were also similar to those observed with fresh sperm. The highest LDL concentrations ensured maintenance of sperm membrane integrity, mitochondrial functionality and sperm viability. However, period of motility, sperm motility, fertilization and hatching rates decreased as LDL concentration increased. Fertilization and hatching rates were similar for treatments including DMSO and trehalose and the fertilization rate obtained with 150 mM trehalose was similar to that observed with fresh sperm. In conclusion, some amides (5% DMA, 8% DMF and 8% MF) and trehalose are efficient cryoprotectans for Colossoma macropomum sperm