Baccharis trimera inibe a produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio atrav?s da via de sinaliza??o da PKC e NADPH oxidase em c?lulas SK Hep-1.

Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Biol?gicas. N?cleo de Pesquisas em Ci?ncias Biol?gicas, Pr?-Reitoria de Pesquisa de P?s Gradua??o, Universidade Federal de Ouro Preto.Baccharis trimera, popularmente conhecida como "carqueja", ? uma planta nativa sul-americana que possui uma alta concentra??o de compostos fen?licos e, portanto, alto potencial antioxidante. Apesar do potencial antioxidante de B. trimera descrito na literatura, n?o existem relatos sobre as vias de sinaliza??o envolvidas neste processo. A enzima NADPH oxidase ? uma fonte importante na produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) em condi??es patol?gicas, como no c?ncer, no diabetes e em processos inflamat?rios. Esta enzima ? ativada por meio de diferentes moduladores, entre os quais destaca-se a prote?na cinase C (PKC), que fosforila a subunidade p47phox da NADPH oxidase, como um contribuinte para a ativa??o do complexo enzim?tico e a consequente gera??o de ERO. Com base nestas informa??es, o objetivo do presente estudo foi avaliar a composi??o fitoqu?mica dos extratos aquoso e hidroetan?lico de Baccharis trimera bem como a influ?ncia destes extratos na modula??o de ERO e na via de sinaliza??o da PKC e NADPH oxidase em c?lulas de hepatocarcinoma humano (SK Hep-1). No presente estudo, a quercetina e a rutina foram utilizadas como controles positivos, pois o efeito antioxidante destes flavonoides tem sido bem estabelecido, sendo estes compostos j? identificados em extratos de B. trimera. No extrato hidroetan?lico foram identificados cinco flavonoides enquanto no extrato aquoso foram identificados tr?s flavonoides por CLAE-EM. A atividade antioxidante in vitro por DPPH tamb?m foi avaliada e os resultados demonstraram que o extrato hidroetan?lico possui um maior potencial em sequestrar o radical DPPH bem como uma maior quantidade de compostos fen?licos em compara??o ao extrato aquoso. Em rela??o ? viabilidade celular, observamos que o extrato hidroetan?lico de B. trimera manteve acima de 70% a porcentagem de c?lulas vi?veis, entretanto em 24 e 48 horas de incuba??o houve uma redu??o da viabilidade (<70%) em concentra??es iguais ou superiores a 25?gmL-1. Em rela??o ao extrato aquoso observamos que a porcentagem de c?lulas vi?veis foi mantida acima de 70% em 12, 24 e 48 de incuba??o. Em rela??o a produ??o de esp?cies reativas foi observado que os extratos de B. trimera (aquoso e hidroetan?lico) diminu?ram os n?veis de ERO em c?lulas SK Hep-1 n?o estimuladas. N?veis reduzidos de ERO tamb?m foram observados nas c?lulas tratadas com quercetina e rutina. Os resultados mostraram que as c?lulas estimuladas com PMA / ionomicina (ativadores de PKC) tiveram um aumento significativo na produ??o de ERO, e esta produ??o voltou aos n?veis basais ap?s tratamento com o DPI (inibidor da NADPH oxidase). O extrato hidroetan?lico de B. trimera e quercetina, mas n?o o extrato aquoso e a rutina, modularam a produ??o de ERO atrav?s da inibi??o da express?o e atividade da prote?na PKC e tamb?m atrav?s da redu??o da fosforila??o da subunidade p47phox da enzima NADPH oxidase. Em conjunto, estes resultados sugerem um mecanismo potencial de a??o de B. trimera na inibi??o da produ??o de ERO atrav?s da via de sinaliza??o da PKC/NADPH oxidase.Baccharis trimera, popularly known as "carqueja" is a native South American plant having high concentration of phenolic compounds and therefore high potential antioxidant. Although the antioxidant potential of B. trimera described in the literature there are no reports on the signaling pathways involved in this process. The NADPH oxidase is a major source in production of reactive oxygen species (ROS) in pathological conditions such as cancer, diabetes and inflammation. This enzyme is activated by different modulators, among which we highlight protein kinase C (PKC), which phosphorylates p47phox subunit of NADPH oxidase, as a contributor to the activation of the enzyme complex and the subsequent generation of ROS . Based on this information, the aim of this study was to evaluate the phytochemical composition of aqueous and hydroethanolic extracts of Baccharis trimera and the influence of these extracts on ROS modulation induced by PKC signaling pathway in human hepatocellular carcinoma cells (SK-Hep 1). In the present study, quercetin and rutin were used as positive controls, since the antioxidant effect of these flavonoids have been well established, and these compounds have been identified in B. trimera extracts. In hydrethanolic extract five flavonoids were identified, and in the aqueous extract identified three flavonoids by CLAE-MS. The antioxidant activity in vitro was also evaluated by DPPH and the results demonstrated that the hydroethanolic extract has a higher potential scavenger the DPPH radical as well as a greater quantity of phenolic compounds as compared to aqueous extract. About cell viability, we observed that the hydroethanolic extract of B. trimera maintained above 70% of viable cells, however at 24 and 48 hours of incubation there was a reduction of viability (