Produ??o, purifica??o e caracteriza??o de uma poligalacturonase de Cylindrocladium pteridis.

Os objetivos deste trabalho foram selecionar diferentes fontes de carbono indutoras da poligalacturonase em cultura submersa de Cylindrocladium pteridis LPF-59, purificar e caracterizar a enzima para identifica??o das propriedades funcionais interessantes para poss?veis aplica??es biotecnol?gicas e industriais. Para produ??o da poligalacturonase, o fungo foi cultivado por 168 horas em meio l?quido composto por uma das seis diferentes fontes de carbono: res?duo de viveiro de eucalipto antigo, res?duo de viveiro de eucalipto novo, folha de eucalipto, caule jovem de eucalipto, caule lignificado de eucalipto e farelo de trigo. A enzima produzida a partir da cultura f?ngica em meio contendo folha de eucalipto foi purificada por cromatografias de troca i?nica e filtra??o em gel. Ao final do processo, a poligalacturonase apresentou um fator de purifica??o de 13,32 vezes, com rendimento de 18,91%. A massa molecular da enzima foi de aproximadamente 68 KDa quando estimada por SDS-PAGE. A enzima apresentou atividade m?xima em pH 4,0 e na temperatura de 60oC. Os valores de meia-vida para a poligalacturonase foram de 260 e 66 minutos, nas temperaturas de 50 e 60oC, respectivamente. Os valores de KM e Vmax, utilizando o substrato ?cido poligalactur?nico, foram 0,525 mg.mL-1 and 5,862 U.mL-1, respectivamente e 6,770 mg.mL-1 e 16,166 U.mL-1 para a pectina c?trica. A enzima apresentou atividade hidrol?tica para ?cido poligalactur?nico, pectina c?trica e PDA (potato dextrose agar) . A atividade enzim?tica foi 97 % inibida por HgCl2 e 85 % por SDS, e na presen?a de CaCl2, FeSO4, lactose e EDTA, a enzima ainda manteve aproximadamente 50% da atividade original. A poligalacturonase identificada neste trabalho apresentou propriedades adequadas para sua poss?vel aplica??o em ind?strias aliment?cias, uma vez que sua atua??o em ambientes ?cidos e em altas temperaturas indica que poderia ser utilizada no processo de prepara??o e clarifica??o do suco de frutas.The objectives of this study were to select different carbon sources induce polygalacturonase in submerged culture of Cylindrocladium pteridis LPF-59, purify and characterize the enzyme to identify the functional properties of interest for potential biotechnological and industrial applications. To polygalacturonase production, the fungus was grown for 168 hours in liquid medium composed of the six different carbon sources: old residue from nursery eucalyptus, new residue from nursery eucalyptus, eucalyptus leaf, young stem eucalyptus, woody stem eucalyptus and wheat bran. The enzyme produced from the fungal culture in medium containing eucalyptus leaf was purified by ion exchange chromatography and gel filtration. At the end of the process, polygalacturonase had a purification factor of 13.32 times, with yield of 18.91%. The molecular mass of the enzyme was about 68 kDa when estimated by SDS-PAGE. The enzyme showed maximal activity at pH 4.0 and at a temperature of 60oC. The values of half-life for polygalacturonase were 260 and 66 minutes at temperatures of 50 and 60 ? C respectively. The values of KM and Vmax, using the substrate polygalacturonic acid were 0.525 mg.mL-1 and 5.862 U.mL-1 respectively and 6.770 mg.mL-1 and 16.166 U.mL-1 for citrus pectin. The enzyme showed hydrolytic activity for polygalacturonic acid, citrus pectin and PDA (potato dextrose agar). The enzyme activity was inhibited by 97% and 85% HgCl2 for SDS, and in the presence of CaCl2, FeSO4, EDTA and lactose, the enzyme still retained approximately 50% of the original activity. The work presented in this polygalacturonase identified suitable properties for their possible application in the food industry, since his action in acidic environments and at high temperatures indicates that it could be used in the preparation process and clarification of fruit juice