Participa??o do ?xido n?trico na infec??o experimental de c?es pelo Trypanosoma cruzi.

Durante a fase da aguda da infec??o pelo Trypanosoma cruzi ocorre uma s?ntese sist?mica de citocinas pr?-inflamat?rias, que ativam componentes da imunidade inata, como as c?lulas NK e macr?fagos. Uma vez ativadas estas c?lulas passam a expressar iNOS e a produzir ?xido N?trico (NO) que poder? contribuir no controle da parasitemia e do parasitismo tecidual. Este trabalho teve como objetivo avaliar a participa??o do NO durante a fase aguda da infec??o de c?es com formas tripomastigotas sang??neas (grupo TS, n=4) ou metac?clicas (grupo TM, n=4) da cepa Berenice-78 do T. cruzi em rela??o ao grupo Controle (n=4). A parasitemia foi determinada diariamente a partir do 10? dia ap?s a infec??o (DAI) at? sua negativa??o. Soro e sangue foram coletados no per?odo que antecedeu a infec??o e aos sete, 14, 21, 28 e 35? DAI para dosagem s?rica de NO e fenotipagem (linf?citos T THY-1+, CD5+, CD4+ e CD8+, linf?citos B CD21+ e mon?citos CD14+). Os animais foram eutanaziados ao final da fase aguda e o ba?o, linfonodo cervical e cora??o (?trios e ventr?culos direito e esquerdo, septo interventricular e ponta) foram coletados e processados rotineiramente para inclus?o em parafina. A avalia??o histopatol?gica, a quantifica??o do parasitismo tecidual e da ?rea marcada para iNOS foram realizadas em cortes histol?gicos corados pela HE ou submetidos a rea??es de imunohistoqu?mica peroxidase anti-peroxidase e estreptoavidina-biotina-peroxidase, respectivamente. Os animais do grupo TM apresentaram aumento nos n?veis s?ricos de NO ao longo da infec??o comparado aos grupos Controle e TS e um atraso no pico de parasitemia em rela??o ao grupo TS. Somente no grupo TM foi observada correla??o positiva entre os linf?citos T CD5+ e CD4+ com os n?veis s?ricos de NO, sugerindo que estas c?lulas contribuem para o aumento dos n?veis s?ricos de NO encontrados neste grupo. O mesmo padr?o observado no soro foi encontrado no ba?o, onde o grupo TM apresentou maior ?rea marcada para iNOS em rela??o aos grupos Controle e TS. Entretanto, no linfonodo cervical o grupo TS revelou diminui??o na ?rea marcada para iNOS quando comparado aos grupos Controle e TM. Este fato pode estar relacionado ? diminui??o do n?mero de macr?fagos na zona medular neste grupo. N?o foi observado parasitismo tecidual no ba?o e linfonodo cervical. O cora??o dos animais do grupo TM apresentou menor parasitismo tecidual e maior ?rea marcada para iNOS enquanto que os animais do grupo TS apresentaram infiltrado inflamat?rio e parasitismo maiores e menor ?rea marcada para iNOS. Com exce??o do ventr?culo esquerdo onde a express?o de iNOS foi maior no grupo TS. Os resultados observados nesta disserta??o verificaram que a fonte do in?culo pode interferir no desenvolvimento da fase aguda da doen?a de Chagas. Ao que parece, animais infectados com as formas TM induzem uma resposta inicial mais eficaz, que limita a parasitemia e, posteriormente, o parasitismo tecidual, refletindo em menor resposta inflamat?ria, caracterizando um quadro de menor dano tecidual. Por outro lado, animais infectados com as formas TS n?o seriam capazes de logo no in?cio da infec??o, induzir uma resposta imune mais elaborada, e conseq?entemente n?o alcan?am o controle r?pido da infec??o contribuindo para o desenvolvimento de intensas altera??es histol?gicas, principalmente card?acas. Portanto, o NO apresenta durante a fase aguda da infec??o experimental de c?es um papel imunoprotetor.During the acute phase of Trypanosoma cruzi infection happens a systemic synthesis of pro-inflammatory cytokines that activates some components of the innate immunity, such as NK cells and macrophages. Once activated, these cells start to express iNOS and to produce Nitric Oxide (NO) what may contribute in the parasitemia and tissue parasitism control. This study aimed to evaluate the participation of NO during the acute phase of dogs infected with blood (BT group, n=4) or metacyclic forms (MT group, n=4) of the Berenice-78 T. cruzi strain in relation to the Control group (n=4). Parasitemia was followed since the 10th day after infection (d.a.i) up to negativation by fresh blood examination collected from the marginal ear vein. Serum and blood was collected before the infection and seven, 14, 21, 28 and 35 d.a.i. to determine the NO seric level and phenotyping (lymphocytes T THY-1 + , CD5 + , CD4 + and CD8 + , lymphocytes B CD21 + and monocytes CD14 + ) respectively. The animals were euthanized in the end of the acute phase. Spleen, cervical lymphnode and heart (right and left atria and ventricle, interventricular septum and tip) were collected and processed routinely for inclusion in paraffin. The animals of the MT group presented increase in the seric levels of NO throughout the infection when compared with the Control and BT groups and a delay in the parasitemia peak when compared with the BT group. Only in the MT group a positive correlation was observed between the T CD5 + and CD4 + lymphocytes and the seric levels of NO. This suggests that these cells contribute to the increase of the seric levels of NO found in this group. The same pattern observed in the serum was found in the spleen, where the MT group presented larger area marked for iNOS in relation to the Control and BT groups. However, in the cervical lymphnode the BT group revealed decrease of the area marked for iNOS when compared to the Control and MT groups. This fact can be related to the decrease of the macrophages numbers in the medullar zone of this group. Tissue parasitism was not observed in the spleen and cervical lymphnode. The heart of MT group presented smaller tissue parasitism and larger area marked for iNOS while the animals of the BT group presented higher inflammatory infiltrated, larger tissue parasitism and smaller area marked for iNOS, excepted to left ventricle. The results demonstrated that the source of the inoculum could interfere in the development of the acute phase of the Chagas disease. Apparently MT forms induce in the animals a more effective initial response that limits the parasitemia and the tissue parasitism, what reflects in smaller inflammatory response and tissue damage. On the other hand, BT forms seem not to be able to induce a more elaborated immune response in the beginning of the infection. Consequently animals infected with BT forms don't reach the fast control of the infection what probably contributes to the development of intense histological alterations, especially in the heart. Taken together, these results suggest that NO presented an important immunoprotection role during acute phase of Be-78 T. cruzi infection in dogs