Isolamento, caracterização estrutural e avaliação do potencial farmacológico de metabólitos especiais das folhas de Schinus terebinthifolius (Anacardiaceae)

The present work was performed a bioguided phytochemical study by antiparasitic and cytotoxic activities of extracts from leaves of Schinus terebinthifolius Raddi (Anarcadiaceae). Initially, this extract showed in vitro cytotoxic potential against the murine melanoma cell line B16F10-Nex2 (IC50 of 82 ± 5g/mL) and antiparasitic activity against amastigotes and promastigotes of Leishmania infantum (100% killing 300g/mL) and Trypanosoma cruzi trypomastigotes (90% kill at 300g/mL). After partition, it was found that the activities were concentrated in the hexane phase which underwent successive purification procedures (silica gel and Sephadex LH-20) fully monitored by bioassay. Thus, two triterpenes were isolated bioactive tirucalanes, whose structures were defined as the (Z)-masticadienoic acid (1) and (Z)-schinol (2) after NMR analysis. After isolation, the compounds 1 and 2 were evaluated against different human tumor cell lines (A2058: melanome, HeLa: cervical carcinome, HCT: colon tumor; SKBR-3: breast cancer and U87: glioblastome) whose IC50 values ranged between > 150-32 ± 3g/mL, being the most active compound 2. With regard to the antiparasitic activity, the results showed that compound 1 is inactive against the promastigotes of L. infantum but has moderate activity for amastigotes with IC50 of 66.51 g/mL compared to positive control (miltefosine - EC50 of 7.25g/mL). Regarding the compound 2, also lack of activity against promastigostes and weak forms potential against amastigotes of L. infantum (EC50 97.59g/mL) was observed. When the two compounds were evaluated for activity against T. cruzi trypomastigotes, it was observed that 1 is inactive (EC50 > 150g/mL) while excellent potential was detected for 2 with EC50 of 16.28g/mL, compared to standard drug (benznidazole) whose EC50 value was determined to be 114.68g/mL. Compounds 1 and 2 showed reduced toxicity front NCTC the cells with CC50 values of > 200 and 95.49g/mL, respectively. In order to establish correlations chemical/biological activity of eight derivatives structure based on the structure 1 by acetylation and reduction reactions of the carbonyl group at C-3, methylation of the carboxylic acid (C-27) were prepared, and hydrogenation of double bond at C-24. After evaluation of the cytotoxic activity was observed that the reduced and acetylated at C-3 substance was best presented result against the human strains tested with IC50 values ranging from 11 ± 1 to 17 ± 1g/mL. Regarding the antiparasitic activity was detected that all semisynthetic derivatives are less active than the natural products 1 and 2, indicating that the presence of the hydroxyl group at C-3 is essential for antitrypanosomal activity while the carbonyl group in the same position is important for potential antileishmanial. Based on the results obtained, it can be inferred that the triterpenes 1 and 2, isolated from S. terebinthifolius can be used as a prototype for the development of new drugs for cancer treatment, as well as the Chagas disease and leishmaniasis.No presente trabalho foi realizado o estudo fitoquímico biomonitorado pelas atividades citotóxica e antiparasitária do extrato das folhas de Schinus terebinthifolius Raddi (Anarcadiaceae). Inicialmente, esse extrato apresentou potencial citotóxico in vitro frente à linhagem celular de melanoma murinho B16F10-Nex2 (CI50 de 82 ± 5 g/mL) e atividade antiparasitária frente a formas amastigotas e promastigotas de Leishmania infantum (100% de morte a 300 g/mL) e tripomastigotas de Trypanossoma cruzi (90% de morte a 300 g/mL). Após partição, foi detectado que as atividades concentravam-se na fase em hexano a qual foi submetida a sucessivos procedimentos de purificação (em gel de sílica e em Sephadex LH-20) totalmente monitorados pelos ensaios biológicos. Desta forma, foram isolados dois triterpenos tirucalanos bioativos, cujas estruturas foram definidas como sendo do ácido (Z)-masticadienóico (1) e do (Z)-schinol (2), após análise por RMN e EM. Após isolamento, os compostos 1 e 2 foram avaliados frente a diferentes linhagens celulares tumorais humanas (A2058: melanoma; HeLa: carcinoma cervical; HCT: tumor de colón; SKBR-3: câncer de mama e U87: glioblastoma) cujos valores de CI50 variaram de > 150 a 32 ± 3 g/mL, sendo o composto 2 o mais ativo. No que se refere à atividade antiparasitária, os resultados obtidos mostraram que o composto 1 é inativo frente a formas promastigotas de L. infantum porém apresenta atividade moderada para formas amastigotas com CI50 de 66,51g/mL em comparação ao controle positivo (miltefosina – CI50 de 7,25 g/mL). No que tange o composto 2, também foi observada ausência de atividade frente a formas promastigostas e fraco potencial frente a formas amastigotas de L. infantum (CI50 de 97,59 g/mL). Quando os dois compostos foram avaliados quanto a atividade frente a formas tripomastigotas de T. cruzi, foi observado que 1 é inativo (CI50 > 150 g/mL) enquanto que foi detectado excelente potencial para 2 com CI50 de 16,28 g/mL, em comparação a droga padrão (benznidazol), cujo valor de CI50 foi determinado como sendo de 114,68g/mL. Os compostos 1 e 2 apresentaram reduzida toxicidade frente as células NCTC, com valores de CC50 > 200 e de 95,49 g/mL, respectivamente. No intuito de se se estabelecer correlações estrutura química/atividade biológica foram preparados oito derivados baseados na estrutura de 1 através de reações de redução e acetilação do grupo carbonílico em C-3, metilação do ácido carboxílico (C-27), além de hidrogenação da ligação dupla em C-24. Após avaliação da atividade citotóxica, foi observado que a substância reduzida e acetilada em C-3 foi a que melhor apresentou resultado frente às linhagens humanas testadas com valores de CI50 variando de 11 ± 1 a 17 ± 1g/mL. No que tange a atividade antiparasitária, foi detectado que todos os derivados semissintéticos são menos ativos que os produtos naturais 1 e 2, indicando que a presença do grupo hidroxílico em C-3 é fundamental para atividade antitripanossoma enquanto que o grupo carbonílico na mesma posição é importante para o potencial anti-leishmania. Frente aos resultados obtidos, é possível inferir que os triterpenos 1 e 2, isolados de S. terebinthifolius, podem ser utilizados como protótipos para o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento do Câncer bem como da doença de Chagas e da leishmaniose.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016