Caracterização da atividade anti-Trichomonas vaginalis de derivado dissubstituído de 2,4-diamino-quinazolina : modulação de peptidades e morte celular por apoptose-like

Trichomonas vaginalis é um protozoário flagelado responsável pela infecção sexualmente transmissível (IST) curável mais prevalente no mundo, tricomoníase. A tricomoníase gera inúmeras complicações como aumento do risco de desenvolvimento de câncer cervical e de próstata, doença inflamatória pélvica, infertilidade, parto prematuro, baixo peso do recém-nascido, além de aumentar do risco de transmissão e aquisição de HIV/AIDS. A classe aprovada para tratamento da tricomoníase já apresenta casos de resistência, desta forma, é imprescindível a busca por novos compostos para o tratamento. Esse estudo teve como objetivo avaliar e caracterizar a atividade anti-T. vaginalis de seis compostos derivados de 2,4-diamino-quinazolina (PH100, PH101, PH110, PH111, PH114 e PH117). Dentre os compostos testados, PH100 mostrou as melhores atividades frente aos isolados de T. vaginalis ATCC 30236, cultivado in vitro por longos períodos e TV-LACM15, isolado clínico fresco. Esse composto também apresentou os melhores índices de seletividade, tanto para células (tumorais ou não) quanto para eritrócitos humanos. Além disso, PH100 apresentou efeito sinérgico quando utilizado com metronidazol, indicando mecanismo de ação diferente do já conhecido por apresentar resistência. Quando avaliado o mecanismo de morte para ATCC 30236, PH100 mostrou agir por vias semelhantes à apoptose, com externalização de fosfatidilserina através da marcação com Anexina-V, modificações na membrana com observação de protrusões através de microscopia eletrônica de varredura, e modulação da expressão gênica de enzimas relacionadas com apoptose em outros organismos, o que não foi observado para TV-LACM15. Outro mecanismo observado para ambos os isolados foi alteração da atividade de peptidases por meio de zimogramas, fato que deve ser avaliado com mais detalhes por espectroscopia de massas e proteoma. Esses resultados indicam que PH100 é um composto promissor para tratamento da tricomoníase.Trichomonas vaginalis is a flagellate protozoan responsible for the most prevalent curable sexually transmitted infection (STI) in the world, trichomoniasis. The infection generates complications such as increased risk of developing cervical and prostate cancer, pelvic inflammatory disease, infertility, premature birth, low birth weight-born, and increase the risk of HIV transmission and acquisition. The class approved for the treatment of trichomoniasis already presents resistance, so it is essential to search for new compounds for treatment. This study aimed to evaluate and characterize anti-T. vaginalis activity of six 2,4-diamine-quinazoline derivative compounds. Among the tested compounds, PH100 showed the best activities against the long-term-grown ATCC 30236T. vaginalis isolate and the fresh clinical isolate TV-LACM15. This compound also presented the best selectivity indexes, for both type of cells (tumor or not) and human erythrocytes. In addition, PH100 had a synergistic effect when used with metronidazole, indicating a mechanism of action different from that already presenting resistance. When evaluated cell death mechanism for ATCC 30236, PH100 was shown to act by apoptosis-like pathways, with phosphatidylserine externalization by Annexin-V labeling, modifications on plasmatic membrane with blebing observation by scanning electron microscopy, and modulation of gene expression of enzymes related to apoptosis in other organisms, that was not observed for TV-LACM15. Another mechanism observed was alteration of peptidases activity by zymograms, a fact that should be evaluated in more detail by mass spectroscopy and proteome. These results indicate that PH100 is a promising compound for treatment of trichomoniasis