Molecular Techniques for the Detection of Tomato Yellow Leaf Curl Geminivirus in Infected Plants and Viruliferous Whiteflies

Biotecnología Aplicada 1999;16:237-241 Molecular Techniques for the Detection of Tomato Yellow Leaf Curl Geminivirus in Infected Plants and Viruliferous Whiteflies Lisset Herrera, Orlene Guerra, Pedro L Ramos, Rudy Peral, Ana L Echemendía, Nadia Ramírez, Vivian Doreste, Pedro Oramas Code Number:BA99038 Abstract The tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) causes major yield losses in tomato production in many tropical and subtropical regions. Therefore, there is an increased need to apply molecular methods for the detection and characterization of the main TYLCV isolates that affect Cuban tomato plantations. A DNA fragment containing the gene encoding the coat protein of a Cuban TYLCV isolate was amplified by polymerase chain reaction (PCR). DNA hybridization with specific radiolabeled probes corroborated the identity of the amplified product, and allowed to analyze the integration into a full-length TYLCV genome. The threshold of TYLCV detection by PCR in plants and viruliferous whiteflies was within the reported range. To detect TYLCV infections, samples collected from tomato plantations of several regions in Cuba were analyzed by PCR. The amplified coat protein gene was also effectively used as a DNA probe in Dot blot assays to detect geminivirus in plants. Keywords: Dot blot, geminiviruses, PCR, TYLCV, virus diagnosis Resumen Técnicas moleculares para la detección del virus del encrespamiento amarillo de la hoja del tomate en plantas infectadas y moscas virulíferas. El virus del encrespamiento amarillo de la hoja del tomate (TYLCV) causa grandes pérdidas en las plantaciones de este cultivo. Los métodos moleculares se hacen cada vez más necesarios para su diagnóstico y caracterización. Mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (RCP), se aisló el gen que codifica la proteína de la cápsida del TYLCV. El uso de sondas radiactivas específicas, corroboró la identidad del producto amplificado y permitió analizar la integración en el genoma del TYLCV. El límite de detección del virus mediante la RCP a partir de ADN total de plantas y moscas virulíferas estuvo en el rango reportado. Mediante la RCP se analizaron muestras de tomate de plantaciones de varias localidades de Cuba. El gen de la proteína de la cápsida amplificado también fue utilizado efectivamente como sonda en ensayos de Dot blot para detectar geminivirus en los cultivos. Palabras claves: diagnóstico de virus, Dot blot, geminivirus, RCP, TYLCV Copyright Elfos Scientiae 199