Isolasi, Purifikasi Parsial Dan Karakterisasi Enzim Protease Dari Isolat Bakteri Limbah Whey Keju

Enzim protease merupakan enzim yang dapat menghidrolisis protein menjadi senyawa yang lebih sederhana seperti peptida dan asam amino. Enzim protease dapat dihasilkan dari kapang dan bakteri. Enzim protease yang dihasilkan dari bakteri mempunyai beberapa keunggulan bila dibandingkan dengan sumber lainnya yaitu dapat diproduksi dalam jumlah besar, produktivitas mudah ditingkatkan, biaya relatif rendah dan enzim yang dihasilkan mudah diisolasi. Bakteri-bakteri proteolitik penghasil protease dapat diperoleh dengan mengisolasi dari tempat pertanian yang mengandung protein seperti limbah pengolahan tahu, limbah pengolahan tempe, pembuangan susu rusak, dan limbah whey keju. whey keju memiliki kandungan protein sebesar 0,8-1%. Ditinjau dari kadar proteinnya, maka limbah whey keju dapat dimanfaatkan sebagai salah satu sumber dalam mengisolasi bakteri proteolitik penghasil enzim protease. Tujuan dilakukannya penelitian ini untuk mendapatkan isolat bakteri penghasil enzim protease dengan aktivitas tinggi dari limbah whey keju dan mengetahui karakteristik dari enzim protease yang dihasilkan dari isolat terpilih. Penelitian dilakukan dengan tahapan sebagai berikut: (1) isolasi bakteri untuk mendapatkan isolat bakteri penghasil enzim protease. (2) isolasi dan purifikasi parsial enzim protease dari bakteri terpilih. (3) karakterisasi enzim protease (pH, suhu, Konsentrasi substrat, nilai Vmaks, Km serta berat molekul dengan elektroforesis (SDS-PAGE)). Hasil penelitian menunjukkan bahwa Isolasi dan skrining bakteri proteolitik dari limbah whey keju diperoleh sepuluh isolat yang memiliki aktivitas protease dimana isolat WQ1 merupakan isolat yang memiliki diameter zona bening terlebar (3,97 mm) dan aktivitas spesifik tertinggi 0,178 U/mg. Dari hasil identifikasi dan karakterisasi diketahui bahwa isolat WQ1 merupakan bakteri Gram positif, katalase positif, bentuk koloni bulat, elevasi cembung, tepian halus, warna koloni putih susu dan bentuk sel batang. Isolat WQ1 diduga tergolong genus Bacillus, disebabkan hasil uji morfologi dan uji biokimia isolat WQ1 mirip dengan genus Bacillus. Proses purifikasi parsial enzim protease dari isolat WQ1 dengan pengendapan amonium sulfat 50% mampu meningkatkan total aktifitas spesifiknya sebanyak 2,494 kali dari 0,231 U/mg menjadi 0,576 U/mg dan pemurnian dialisis mampu meningkatkan total aktifitas spesifiknya sebanyak 12,584 kali dari 0,576 U/mg menjadi 2,907 U/mg. Karakterisasi protease dari WQ1 menunjukkan aktivitas optimum pada pH 7,5 dan pada suhu 37oC. Nilai Km protease ini 0, 2994 mg/ml dan Vmaks nya 0,2073 unit/ml. Hasil SDS-PAGE diperoleh 4 pita protein dan zimogram diperoleh satu pita aktif yang menunjukkan aktivitas proteasenya yaitu pada berat molekul 55,31 kDa