Caracteriza??o bioqu?mica de peroxidase da abobrinha (Cucurbita pepo)

As peroxidases podem ser obtidas de v?rios vegetais, como batata doce, rabanete, pepino, entre outros. A raiz forte (HRP) ? a principal fonte comercial de peroxidase sendo geralmente cultivada em pa?ses de clima frio. No entanto, o alto custo da HRP restringe sua aplica??o. A abobrinha (Cucurbita pepo) ? um vegetal amplamente cultivado no Brasil, sendo relativamente acess?vel e de baixo custo, podendo vir a ser uma fonte promissora de peroxidase. Portanto, o objetivo deste estudo foi extrair, purificar e caracterizar a peroxidase produzida pela abobrinha (Cucurbita pepo) para avaliar a viabilidade desta fonte enzim?tica. O extrato bruto da casca e do fruto da abobrinha sem a casca foi obtido usando tamp?o fosfato 0,1 mol L-1, pH 7, sendo posteriormente precipitado com sulfato de am?nio e aplicado a cromatografia de exclus?o em gel. A peroxidase proveniente da casca da abobrinha apresentou maior atividade, concentra??o de prote?na, atividade espec?fica e rendimento que a enzima proveniente do fruto da abobrinha sem a casca. O processo de purifica??o demonstrou ser eficiente resultando em uma alta atividade espec?fica (11,109 U.mg-1). A presen?a da peroxidase no gel, ap?s eletroforese, foi confirmada pela presen?a de duas bandas com pesos moleculares de aproximadamente 50 kDa e 60 kDa, sugerindo a exist?ncia de duas isoenzimas. A enzima apresentou pH e temperatura ?timos na faixa de 7,0 a 8,0 e entre 25 ?C e 30 ?C, respectivamente. A estabilidade m?xima ocorreu na faixa de pH entre 6,0 e 8,0, a 30 ?C. A enzima demonstrou alta afinidade pelo guaiacol e tamb?m pelo per?xido de hidrog?nio, apresentando Km de 4,68 mM e 4,76 mM, respectivamente. A enzima foi ativada na presen?a de Cu2+ e Fe3+ nas concentra??es de 1 mM, 5 mM e 10 mM e Mn2+ e Ca2+ nas concentra??es de 1 e 5 mM. A peroxidase de abobrinha n?o sofreu ativa??o pelos solventes org?nicos testados. O estudo possibilitou a obten??o da peroxidase extra?da de uma fonte vegetal extremamente acess?vel, utilizando m?todo de extra??o simples, r?pido e econ?mico. Os resultados sugerem que a abobrinha pode ser uma fonte promissora para a obten??o de peroxidase a ser utilizada em v?rias aplica??es como em diagn?stico, detoxifica??o de efluentes, tecnologia de alimentos, entre outras ?reas.Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES)Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2019.Peroxidases can be obtained from various vegetables, such as sweet potatoes, radishes, cucumbers, among others. The strong root (HRP) is the main commercial source of peroxidase being generally grown in cold climate countries. However, the high cost of HRP restricts its application. The zucchini (Cucurbita pepo) is a vegetable widely cultivated in Brazil, being relatively accessible and low cost, and can be a promising source of peroxidase. Therefore, the objective of this study was to extract, purify and characterize the peroxidase produced by zucchini (Cucurbita pepo) to evaluate the viability of this enzymatic source. The crude extract of the peel and the fruit of the zucchini without the peel was obtained using 0.1 mol L-1 phosphate buffer, pH 7, and then precipitated with ammonium sulfate and applied to gel exclusion chromatography. The peroxidase from the zucchini shell presented higher activity, protein concentration, specific activity and yield than the enzyme from the fruit of the zucchini without the peel. The purification process proved to be efficient resulting in a high specific activity (11.109 U.mg-1). The presence of peroxidase in the gel after electrophoresis was confirmed by the presence of two bands with molecular weights of approximately 50 kDa and 60 kDa, suggesting the existence of two isoenzymes. The enzyme presented optimum pH and temperature in the range of 7.0 to 8.0 and between 25 and 30 ?C, respectively. Maximum stability occurred in the pH range between 6.0 and 8.0 at 30 ? C. The enzyme showed high affinity for guaiacol and also for hydrogen peroxide, presenting Km of 4.68 mM and 4.76 mM, respectively. The enzyme was activated in the presence of Cu2+ and Fe3+ in concentrations of 1 mM, 5 mM and 10 mM and Mn2+ and Ca2+ in the concentrations of 1 and 5 mM. Zucchini peroxidase was not activated by the organic solvents tested. The study allowed the extraction of peroxidase from an extremely accessible vegetable source, using a simple, fast and economical extraction method. The results suggest that zucchini may be a promising source for obtaining peroxidase to be used in several applications such as in diagnostic, effluent detoxification, food technology, among other areas