Exosomas secretadas por las células de cáncer de mama MDA-MB-231 post-interferencia de los RNAs mitocondriales no codificantes antisentido (ASncmtRNA) disminuyen las propiedades tumorogénicas

Tesis (Magíster en Biotecnología)El cáncer de mama es una de las enfermedades con mayor mortalidad en mujeres en el mundo donde las terapias de hoy en día, como la cirugía y radioterapia son insuficientes ya que no son efectivas en todos los pacientes, ocasionando una resistencia a éstos tratamientos lo que conlleva a una progresión del cáncer; principal razón que impulsa a buscar nuevas terapias para combatir ésta enfermedad. Nuestro grupo ha propuesto un nuevo blanco terapéutico, correspondiente a una familia de RNAs no codificantes de origen mitocondrial (ncmtRNAs) conformada por los transcritos sentido (SncmtRNA) y antisentido (ASncmtRNA). Al interferir los ASncmtRNAs con oligonucleótidos antisentido (ASOs), en líneas celulares normales y tumorales se observó una muerte celular masiva y selectiva sólo para células tumorales independiente de su origen y agresividad. El mecanismo por el cual ocurre esta muerte celular en células tumorales aún no ha sido elucidado completamente y es por esto que se quiso indagar en el rol que cumplirían los exosomas secretados posterior a la interferencia de los ASncmtRNAs. Los exosomas son vesículas extracelulares que pueden influir en el comportamiento de la célula receptora debido al contenido que éstos presentan, ya sean proteínas, lípidos o RNAs. Es por esto que primero se evaluó si las células de cáncer mama MDA-MB-231 eran capaces de secretar exosomas posterior a la interferencia de los ASncmtRNAs. Con resultados positivos, se purificó y caracterizó éstas vesículas por Western blot, Microscopia Electrónica de Transmisión (TEM) y un Análisis del Seguimiento de Nanopartículas (NTA). Una vez caracterizados los exosomas, éstos se utilizaron para evaluar ciertas propiedades tumorogénicas como invasión y la capacidad de crecer independiente de anclaje, tanto en comunicación autocrina como paracrina, y se observó una disminución en el potencial tumorogénico al estimular con exosomas aislados post-interferencia de los ASncmtRNAs. Los resultados de esta tesis sugieren que los exosomas derivados de la terapia disminuyen en las células tumorales propiedades tumorogénicas como: crecimiento independiente de anclaje, migración e invasión, tanto en comunicación autocrina como paracrina, efecto que podría ser atribuible al contenido exosomal.Breast Cancer is one of the most deadly diseases in women in the world. Current therapies, such as surgery and radiotherapy are not good enough treatments for this disease, since they are not effective in all patients, which causes resistance to these treatments leading to cancer progression, and it is for this reason that it is necessary to seek new therapies to target this disease. Our group has proposed a new therapeutic target, that corresponds to a family of non-coding mRNAs of mitochondrial origin (ncmtRNAs), conformed by sense (SncmtRNA) and antisense (ASncmtRNA) transcripts. The interference of ASncmtRNAs with antisense oligonucleotides (ASOs), in normal and tumor cell lines, generates massive and selective cell death just for tumor cells independent of their origin and agressiveness. The mechanism by which cell death occurs in tumor cells has not yet been elucidated completely and that is why we wanted to inquire into the role of secreted exosomes following the interference of the ASncmtRNAs. Exosomes are extracellular vesicles that can influence the behavior of the recipient cell due to the content they present, wether it be proteins, lipids or RNAs. This is why we first evaluated whether breast cancer cells MDA-MB-231 were able to secrete exosomes after ASncmtRNA interference. With positive results we purified and characterized these vesicles by Western blot, Transmission Electron Microscopy (TEM) and Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). Once exosomes were characterized, they were used to evaluate certain tumorigenic properties such as invasion and anchorage independent capacity in paracrine and autocrine communication. A decrease in the tumorigenic potential was observed by stimulating recipient cells with exosomes isolated post-interference of the ASncmtRNAs. The results of this thesis suggests that exosomes derived from the therapy decrease tumorigenic properties in tumor cells such as, anchorage-independent growth, migration and invasion both in autocrine and paracrine communication. The effect could be attributable to exosomal content