Caracterización de la vía endocítica de esporas de Clostridium difficile en células epiteliales intestinales y su implicancia en infecciones recurrentes de Clostridium difficile en un modelo murino

Tesis (Magíster en Biotecnología)Clostridium difficile es un patógeno Gram-positivo, anaerobio estricto y formador de esporas. Este patógeno es el responsable de la mayoría de muertes causadas por diarreas asociadas a antibióticos. Las infecciones por C. difficile (ICD) tienen una elevada tasa de recurrencia, que varía entre el 20% después del primer episodio, a un 40 y 60% después del segundo y tercero, respectivamente. Se ha demostrado que las esporas son el morfotipo de transmisión y persistencia en C. difficile para generar infecciones por C. difficile recurrentes (ICD-R). Sin embargo, poco es conocido sobre los mecanismos de persistencia de las esporas en el hospedero. En este sentido, datos no publicados de nuestro laboratorio demuestran que las esperos de C. difficile son capaces de entrar en células epiteliales intestinales (CEIs) en un proceso dependiente de la polimerización actina, el cual podría ser uno de los mecanismos de persistencia. El objetivo de esta tesis es identificar las vías de endocitosis involucradas en la entrada de las esporas de la cepa R20291 de C. difficile y evaluar si el uso de inhibidores de la endocitosis de esporas reducen los casos de ICD-R en un modelo murino. En este trabajo encontramos que; i) mediante análisis de micrografías electrónicas de transmisión, microscopía confocal de fluorescencia e inhibidores farmacológicos, las esporas de C. difficile se asocian y requiren vesículas de clatrina, caveolina y macropinosomas para ingresar a las células; ii) el uso de un inhibidor de endocitosis en ratones infectados por C. difficile, redujo la incidencia de diarrea durante la ICD-R en un 67% y un 80% al ser administrados de forma intraperitoneal y oral respectivamente, lo cual sugiere que la endocitosis de esporas es el mecanismo de persistencia de C. difficile en el hospedero para generar ICD-R. En consecuencia, este trabajo amplía las aristas para generar terapias farmacológicas combinadas para tratar infecciones recurrentes por C. difficile