Vías de señalización intracelulares activadas por resolvina D1 y E1 en fibroblastos cardíacos

Memoria para optar al título de Químico FarmacéuticoLos fibroblastos cardíacos (FCs) son uno de los tipos celulares más importantes del corazón. Ellos contribuyen a mantener la homeostasis proteica de la matriz extracelular y participan de forma muy activa en la respuesta inflamatoria cardíaca que se origina como consecuencia de un daño tisular. Además, se denominan células centinelas de la inflamación, por su capacidad de responder de forma eficiente a través de la secreción de citoquinas y quimioquinas que favorecen el reclutamiento de leucocitos a la zona de daño. Las resolvinas (Rv) son mediadores lipídicos especializados que participan activamente en la resolución de la inflamación. La RvD1 se biosintetiza a partir del ácido docosahexaenoico y la RvE1 del ácido eicosapentaenoico. Hasta la fecha, no existe evidencia sobre la expresión de los receptores de las Rv ni sobre sus vías de señalización intracelulares en FCs. El objetivo de este trabajo fue demostrar la presencia de los receptores de la RvD1 y RvE1 en FCs de ratas neonas y estudiar las vías de señalización intracelular activadas por estas moléculas mediante la medición de los niveles de adenosin monofosfato cíclico (cAMP) y las señales de calcio (Ca2+) intracelular. Nuestros resultados muestran que FCs de ratas neonatas poseen los receptores ALX/FPR2 y ChemR23, de las RvD1 y RvE1, respectivamente. Además, se obtuvo que los niveles de cAMP no son modificados por las Rv. Sin embargo, la RvD1 incrementó los niveles de cAMP inducidos por ISO de manera dependiente de ALX, y la RvE1 tendió a producir el mismo efecto. Por otra parte, las Rv mueven Ca2+, aunque esto no haya sido significativo en términos de amplitud. También, la RvE1 redujo la amplitud y el área bajo la curva de la señal de Ca2+ citosólica y aumentó la amplitud de la señal de Ca2+ nuclear inducida por Angiotensina II (Ang II). Por lo tanto, se concluyó que la hipótesis propuesta fue cumplida de manera parcial y que, a pesar de que ambas Rv poseen vías de señalización similares en un inicio, los mecanismos gatillados de manera posterior no se comparten. Finalmente, en su conjunto, los resultados obtenidos nos muestran que, en los FCs, las vías de señalización gatilladas por las Rv son distintas. Lo anterior tomaría relevancia en presencia de Ang II, puesto que sólo la RvE1 moduló la amplitud de la señal de Ca2+, lo que podría indicar que sólo esta Rv podría mitigar y/o prevenir la fibrosis cardíaca inducida por este péptidoCardiac fibroblasts (CF) are one of the most important cell types of the heart. They contribute to maintain the extracellular matrix protein homeostasis and participate very actively in the cardiac inflammatory response that originates as a consequence of tissue damage. In addition, they are called sentinel cells of inflammation, because of their capacity to respond efficiently through the secretion of cytokines and chemokines that favor the recruitment of leukocytes to the area of damage. Resolvins (Rv) are specialized lipid mediators that actively participate in the resolution of inflammation. RvD1 is biosynthesized from docosahexaenoic acid and RvE1 from eicosapentaenoic acid. To date, there is no evidence about the expression of Rv receptors and their intracellular signaling pathways in CF. The objective of this work was to demonstrate the presence of RvD1 and RvE1 receptors in neonatal rats CF and to study the intracellular signaling pathways activated by these molecules by measuring cyclic adenosine monophosphate (cAMP) levels and intracellular calcium (Ca2+) signals. Our results showed that neonatal rats CF have ALX/FPR2 and ChemR23 receptors for RvD1 and RvE1, respectively. In addition, it was obtained that cAMP levels were not modified by Rv. However, RvD1 increased cAMP levels ISO-induced in a ALX-dependent manner, and RvE1 tended to produce the same effect. On the other hand, the Rv move Ca2+, although this has not been significant in terms of amplitude. However, RvE1 reduced the amplitude and the area under the curve of the cytosolic Ca2+ signal whereas increased the amplitude of the nuclear Ca2+ signal induced by angiotensin II (Ang II). Therefore, it concluded that the proposed hypothesis was partially fulfilled and that, although both Rv have similar signaling pathways at the beginning, the mechanisms triggered later are not shared. Finally, as a whole, the results obtained show us that in CF, the signaling pathways triggered by Rv are different. This would be relevant in the presence of Ang II, since only RvE1 modulated the amplitude of the Ca2+ signal, which could indicate that only this Rv could mitigate and / or prevent cardiac fibrosis induced by this peptideFONDECYT N ° 117042