Efeito do uso de probióticos via oral na cicatrização de feridas excisionais cutâneas em ratos

Orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos Ligocki CamposCoorientador: Prof. Dra. Thais Andrade Costa CasagrandeTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa : Curitiba, 03/12/2019Inclui referências: p. 95-102Resumo: A pele é uma rede funcional envolvendo microbiota, a barreira física, química e imunológica. Alterações no sistema imune da pele interferem na cicatrização de feridas. Probióticos melhoram a resposta imune intestinal e cutânea, por meio de complexos mecanismos. OBJETIVO: Avaliar o efeito do uso perioperatório de probióticos, via oral, na cicatrização de feridas excisionais cutâneas, em ratos. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizados 72 ratos, machos Wistar, com peso aproximado de 250+-26,7 gramas, procedentes do biotério da Universidade Positivo (UP). Os ratos foram pesados e divididos em 2 grupos com 36 cada, um grupo controle (que recebeu maltodextrina 250 mg/dia) e um grupo probiótico (que recebeu probiótico Probiatop® da FQM-FARMA, na dose de 250 mg/dia, correspondente a dose de 200.000 UFC (unidades formadoras de colônias), administrado via oral, 1 vez ao dia com auxílio de uma espátula, começando 5 dias antes da cirurgia até o dia da eutanásia. Cada grupo foi subdividido em 3 sub-grupos com 12 ratos cada, de acordo com o dia da eutanásia em 3PO, 7PO e 10PO(pós-operatório). Foram avaliados o peso, aspectos macroscópicos, histológicos, colágeno tipo I e tipo III, a expressão de TGF-? e as citocinas TNF-?; IL6 e IL17 da ferida no 3PO; 7PO e 10PO. RESULTADOS: Não houve modificação no peso, em ambos os grupos. A contração da ferida foi maior no grupo probiótico, resultando em menor área cruenta no 7oPO (43,4±5,2 vs 47,2±4,9mm2; p= 0,013). O score geral do HE, incluindo edema, congestão, polimorfonucleares, fibrose, neovasos e monócitos foi menor no grupo probiótico em relação ao controle (Md= -2 a 2 vs Md=-4 a 0; p3PO=0,017 vs p7PO=0,014). A administração de probióticos resultou em aumento da fibrose do 3oPO para o 7oPO (p=0,028). A produção de colágeno tipo I foi maior no grupo probiótico no 10oPO (p=0,007), e houve aumento do colágeno tipo III no 7oPO (p=0,014) quando comparado com o controle. A administração de probiótico resultou em maior fibrose e deposição de colágeno e menor área cruenta da ferida em relação ao controle. Com relação às citocinas, quando comparados controle vs probiótico, o grupo probiótico evolui com redução do TNF-? no 3oPO (p=0,023); houve redução da IL6 no 7oPO (p=0,003) e houve redução da IL17 no 3oPO (p=0,039) e no 7OPO (P=0,024).O TGF-? foi menor no 10oPO (p=0,031) no grupo probiótico. Os resultados encontrados sugerem que o uso de probiótico atenuou a resposta inflamatória, por diminuir a expressão das citocinas pró-inflamatórias. Quanto ao TGF-?, este aumentou em ambos os grupos, uma vez que uma de suas funções é organizar a matriz provisória por meio do gradiente quimiostático e orientar a organização das fibras, o que pode ser confirmado com o aumento da fibrose no 7oPO. Entretanto a expressão de TGF-? foi significativamente menor no 10oPO no grupo probiótico, sugerindo que neste grupo o processo cicatricial já estava em fase final neste período. CONCLUSÃO: A administração oral de probióticos atenua a fase inflamatória das feridas, possivelmente por acelerar o processo de fibrose e a deposição de colágeno. Antecipa a expressão de citocinas pró-inflamatórias IL6 e TNF-? e acelera a redução de IL17 e TGF-?, resultando em cicatrização organizada e madura em menos tempo. Palavras chave: cicatrização cutânea, colágeno, citocinas, probióticos, TGF-B.Abstract: The skin is a functional network that surrounds microbiota, the physical, chemical and immunological barrier. Changes in the immune system of the skin may interfere with wound healing. Probiotics improve the intestinal and skin immune response through complex mechanisms. OBJECTIVE: To evaluate the effect of perioperative oral administration of probiotics on the cutaneous healing/scarring process in rats MATERIAL AND METHODS: Seventy-two male Wistar rats, weighing approximately 250+-26,7 grams, from the Positivo University (UP) were used. The rats were weighed and divided into 2 groups with 36 animals each, one control group (receiving maltodextrin 250 mg/day) and one probiotic group (receiving Probiatop® from FQMFARMA), at a dose of 250 mg/day, which corresponds to 200,000 CFU (colony forming units) administered orally once a day with the aid of a spatula, starting 5 days before surgery until the day of euthanasia. Each group was subdivided into 3 groups of 12 rats each according to the day of euthanasia at 3th PO, 7th PO and 10th PO. Weight, macroscopic and histological aspects, TGF-? expression and cytokines TNF- ?; and IL6 and IL17 in the wound at 3th PO, 7th PO and 10th PO day were evaluated. RESULTS: There was no significant weight change in either group. The contraction of the wound was greater in the probiotic group when compared to the control, resulting in a smaller wuond area in the, 7thPO day (43.4 ± 5.2 vs 47.2 ± 4.9mm2; p = 0.013). Histologically the overall HE score including edema, congestion, polymorphnuclear, fibrosis, neovascular and monocytes was lower in the probiotic group as compared to controls (Md = -2 to 2 vs Md = -4 to 0; p3PO = 0.017 vs p7PO = 0.014). Probiotic administration resulted in increased fibrosis from the 3th PO to 7th PO day (p = 0.028). Type I collagen production was higher in the probiotic group at 10thPO day (p = 0.007), and there was an increase in type III collagen at the 7thPO day (p = 0.014) when compared to controls. Therefore, probiotic administration resulted in increased fibrosis and collagen deposition and smaller wound area as compared to the control group. Regarding cytokines, when compared control vs probiotic, the probiotic group presented reduction in TNF-a expression in the 3th PO day (p = 0.023); a reduction in IL6 at 7th PO day (p = 0.003). and reduction in IL17 in the 3th PO day (p=0,039) e no 7thPO day (P=0,024).. TGF-? was lower at 10th PO day (p = 0.031) in the probiotic group. The results suggest that the use of probiotics attenuated the inflammatory response by decreasing the expression of proinflammatory cytokines. As for TGF-?, it increased in both groups, since one of its functions is to organize the provisional matrix through the chemostatic gradient and guide the fiber organization, which can be confirmed by the increase in fibrosis in the 7th PO found here. However, TGF-? expression was significantly lower at 10th PO in the probiotic group, suggesting that in this group the healing process was already in its final phase in this period. CONCLUSION: Oral administration of probiotics attenuates the inflammatory phase of the wounds, possibly by accelerating the fibrosis process and collagen deposition. Attenuates the expression of proinflammatory cytokines IL-6 and TNFalpha and accelerating the reduction of IL17 and TGF-beta, resulting in a better mature and organized healing. Keywords: cutaneous healing, collagen, cytokines, probiotics, TGF-