Uji aktivitas antioksidan isolat steroid hasil kromatografi kolom fraksi etil asetat mikroalga Chlorella sp.

INDONESIA : Chlorella sp. termasuk dalam spesies mikroalga dari kelompok Chlorophyta yang mengandung berbagai senyawa metabolit sekunder, salah satunya steroid. Senyawa steroid mempunyai potensi untuk dimanfaatkan sebagai antioksidan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui hasil pemisahan steroid fraksi etil asetat mikroalga Chlorella sp. menggunakan kromatografi kolom gradien eluen, aktivitas antioksidan steroid terhadap DPPH, dan hasil identifikasinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis, FTIR, dan LC-MS/MS. Chlorella sp. dikultivasi dalam MET 4% dan pemanenan dilakukan pada hari ke-10. Ekstraksi Chlorella sp. dilakukan dengan metode maserasi menggunakan metanol dan dipartisi dengan etil asetat. Fraksi yang didapat dipisahkan untuk diambil steroidnya menggunakan kromatografi kolom gradien eluen. Aktivitas antioksidan diuji dengan metode DPPH. Panjang gelombang maksimum steroid diukur dengan spektrofotometer UV-Vis dan monitoring jenis ikatan antar atom dan gugus fungsinya dilakukan menggunakan FTIR. Identifikasi jenis senyawa steroid dilakukan menggunakan LC-MS/MS. Hasil penelitian menunjukkan pemisahan steroid fraksi etil asetat mikroalga Chlorella sp. menggunakan kromatografi kolom gradien eluen menghasilkan 4 fraksi tunggal, 1 fraksi steroid dan 3 fraksi triterpenoid. Uji aktivitas antioksidan isolat steroid menghasilkan nilai IC50 989.539 ppm. Spektrum UV-Vis menghasilkan panjang gelombang maksimum pada 275,0; 222,0; 205,0; dan 202,0 nm. Identifikasi dengan FTIR menghasilkan serapan gugus O–H, –CH2–, C═C(CH2)n sebagai representasi dari exoxyclic double bond, C═C, geminal dimetil, dan C–O untuk alkohol sekunder. Identifikasi menggunakan LC-MS/MS pada fraksi etil asetat menghasilkan jenis senyawa steroid berupa kampesterol, β-sitosterol, dan stigmasterol dengan kelimpahan terbanyak berupa kampesterol, sedangkan identifikasi pada isolat hasil kromatografi kolom menghasilkan jenis senyawa steroid berupa stigmasterol. ENGLISH : Chlorella sp. included in the species of microalgae from the Chlorophyta group which contains various secondary metabolites, one of them is steroids. Steroid compounds have the potential to be used as antioxidants. The purpose of this research was to determine the results of the separation of steroid of ethyl acetate fraction in microalgae Chlorella sp. using gradient eluent column chromatography, antioxidant activity of steroid on DPPH, and identification results using UV-Vis spectrophotometer, FTIR, and LC-MS/MS. Chlorella sp. cultivated in MET 4% and harvesting was done on the 10th day. Extraction of Chlorella sp. done by maceration method using methanol and partitioned with ethyl acetate. The obtained fraction was separated to take steroids using eluent gradient column. Antioxidant activity was tested by DPPH method. The maximum wavelength of steroids was measured by UV-Vis spectrophotometer and monitoring of the types of bonds between atoms and their functional groups using FTIR. The identification of the type of steroids using LC-MS/MS. The results showed the separation of steroid ethyl acetate fraction in microalgae Chlorella sp. using gradient eluent column chromatography produced 4 single fractions, 1 steroid fraction and 3 triterpenoid fractions. Antioxidant activity test of steroid isolate produced IC50 989.539 ppm. The spectra of UV-Vis produce the maximum wavelength at 275,0; 222,0; 205,0; and 202,0 nm. Identification with FTIR produces the band absorption of O–H group, –CH2–, C═C(CH2)n as representations of exoxyclic double bond, C═C, geminal dimethyl, and C–O for secondary alcohols. Identification using LC-MS/MS on ethyl acetate fraction produced steroid compounds such as campesterol, β-sitosterol, and stigmasterol with the highest abundance in the form of campesterol, while identification of column chromatography isolate produced the type of steroid compounds stigmasterol