Modulation of the inflammatory response after spinal cord injury

Departament responsable de la tesi: Departament de Biologia Cel·lular, de Fisiologia i d'Immunologia.La lesión de médula espinal (LME) consiste en la disrupción de la vías ascendentes y/odescendentes de información debido a un daño del tejido nervioso. Puesto que los axones delsistema nervioso central no regeneran, el daño conduce a una falta de comunicaciónpermanente entre el cerebro y las regiones del cuerpo que están por debajo de la zona delesión. Esta falta de comunicación se traduce en pérdida de movimiento, pérdida de sensación,déficits autonómicos y dolor. La magnitud final de estos déficits se define en base al nivel, laseveridad y el tipo de lesión. Sin embargo, hay muchos procesos secundarios degenerativosque ocurren en la médula espinal después del daño primario y que contribuyen a los déficitsfinales. Entre estos procesos, la respuesta inflamatoria es uno de los más importantes.La LME activa una respuesta inflamatoria producida principalmente por macrófagos ymicroglía. Todo el proceso está dirigido por citoquinas. Estas células y mediadores sonfundamentales para la limpieza de los restos celulares y la recuperación del tejido dañado. Sinembargo, a diferencia de otros tejidos, la respuesta inflamatoria del sistema nervioso centralno se resuelve adecuadamente. Una respuesta inflamatoria exacerbada puede producir dañosen el tejido vecino sano, incrementando el tamaño de la lesión y empeorando los déficitsfinales. El objetivo principal de esta tesis es la modulación de la respuesta inflamatoria despuésde la LME, manteniendo los beneficios esenciales de la respuesta inflamatoria pero evitandolos daños atribuidos a una respuesta exacerbada. Según nuestra hipótesis, esta modulaciónresultará en una mejora de la preservación del tejido y de la recuperación funcional en unmodelo murino de LME.Las primeras dos estrategias de esta tesis están basadas en la supresión del ambienteproinflamatorio actuando sobre IL-1a e IL-1b, citoquinas principales en las primeras fases dela respuesta inflamatoria. La actuación sobre IL-1a se realizó mediante MABp1, un anticuerpomonoclonal recientemente aprobado para su uso clínico. Este anticuerpo neutraliza la formasoluble de la IL-1a e inhibe su unión a los receptores. A pesar de los hallazgos prometedoresen otras enfermedades mediadas por la respuesta inflamatoria, MABp1 no promovióprotección después de una LME. La actuación sobre IL-1b se realizó mediante OLT1177, uninhibidor del inflamasoma NLRP3 necesario para el procesamiento y la liberación de IL-1b e IL-18. OLT1177 promovió de manera exitosa la preservación del tejido y la mejora funcionalcuando se inyectó intraperitonealmente después de una LME. Puesto que OLT1177 es seguroen humanos, es un candidato prometedor para el tratamiento de la LME.Las últimas dos estrategias de esta tesis están basadas en la potenciación del ambienteantiinflamatorio mediante IL-37 en IL-13. Resultados previos de nuestro grupo mostraron queincrementar los niveles de IL-37 promovía un efecto protector después de una LME. En estatesis estudiamos la contribución de la rutas nucleares y extracelulares en el papel de la IL-37.Demostramos que, aunque las dos rutas promueven efectos protectores, los efectosbeneficios después de una LME eran atribuidos principalmente a una señalización extracelular.Incrementar los niveles de IL-13 promovió un ambiente antiinflamatorio después de una LME,como había sido previamente demostrado por nuestro grupo con IL-4. Sin embargo, adiferencia de IL-4, IL-13 no proporcionó mejora funcional. Para determinar las diferencias- 12 -entre estas dos citoquinas, realizamos la primera secuenciación de ARN de las poblaciones demacrófagos y microglía después de una LME. Observamos que, aunque ambas citoquinastienen el mismo efecto en la modulación del ambiente inflamatorio, inducen diferencias en elmetabolismo de macrófagos y microglía. El metabolismo inducido por IL-4 era más oxidativomientras que el metabolismo inducido por IL-13 era más glucolítico. Puesto que la respuestainflamatoria es un proceso muy exigente, la forma en la que las células obtienen energía puedeser crucial para el desarrollo de la respuesta inmune y podría explicar las diferenciasobservadas a nivel funcional.El futuro de la LME es multidisciplinar. A través de esta tesis, proporcionamos evidencias paraapoyar que la modulación trófica del ambiente inflamatoria es un componente fundamentalde las nuevas estrategias terapéuticas para tratar la LME.Spinal cord injury (SCI) consists in the disruption of the ascending and/or descending information pathways due to the death of nervous tissue. Since axons from the central nervous system do not regenerate, injury results in a permanent lack of communication between the brain and the regions of the body below the lesion site. This lack of communication translates into loss of movement, loss of sensation, autonomic deficits, and pain. The final magnitude of these dysfunctions is defined by the level, the severity, and the type of injury. However, there are many secondary degenerative processes that take place in the spinal cord after primary injury and that contribute to the final dysfunctions. Among these processes, inflammatory response is one of the most important. Spinal cord injury elicits an inflammatory response produced mainly by macrophages and microglia. All the process is orchestrated by cytokines. These cells and mediators are fundamental for the clearance of cellular debris and the healing of damaged tissue. However, in contrast to other tissues, inflammatory response in the central nervous system is not properly resolved. Exacerbated and uncontrolled inflammatory response produces damage to healthy neighboring tissue, increasing the lesion size and worsening the final deficits. The main objective of this thesis is the modulation of the inflammatory response after SCI, maintaining the essential benefits of an immune response but avoiding dangers of exacerbated immunity. We hypothesize that this modulation will result in improvement of tissue preservation and functional recovery in a murine model of SCI. First two strategies of this thesis are based on the suppression of pro-inflammatory environment targeting IL-1a and IL-1b, main cytokines in the first stages of the inflammatory response. Targeting of IL-1a was performed by MABp1, a monoclonal antibody recently approved for clinical use. This antibody neutralizes the soluble form of IL-1a and inhibits its binding to receptors. Besides promising findings in other inflammatory-mediated diseases, MABp1 failed to promote protection after SCI. Targeting of IL-1b was performed by OLT1177, an inhibitor of the NLRP3 inflammasome needed for the processing and release of IL-1b and IL-18. OLT1177 successfully promoted tissue protection and locomotor improvement when injected intraperitoneally after SCI. Since OLT1177 is safe in humans, it is a promising candidate for the treatment of SCI. Last two strategies of this thesis are based on the potentiation of the anti-inflammatory environment by IL-37 and IL-13. Previous result from our group showed that increasing IL-37 levels promoted a protective effect after SCI. Here we studied the contribution of the nuclear and extracellular pathways to the role of IL-37. We demonstrated that, although both pathways promote protective effects, benefits after SCI were attributed mainly to extracellular signaling. Increasing levels of IL-13 promoted anti-inflammatory environment after SCI, as previously reported by our group with IL-4. However, in contrast to IL-4, IL-13 failed to confer functional - 10 - improvement. To determine differences between these two cytokines, we performed the first cell-specific RNA sequencing of macrophages and microglia after SCI. We observed that, although both cytokines have the same effect on the modulation of the injury environment, they induce differences in the metabolism of macrophages and microglia. Metabolism induced by IL-4 was more oxidative whereas metabolism induced by IL-13 was more glycolytic. Since inflammatory response is a very demanding process, how cell obtain energy may be crucial for the development of the immune response and may explain differences observed at functional level. Future of SCI is multidisciplinary. Through this thesis we provide evidences to support that trophic modulation of the injury environment is a fundamental component of novel therapeutic approaches to treat SCI