Construction of recombinant yeast (Saccharomyces cerevisiae) producing ?(1,3) glucanase as a fish feed addictives.

TEZ9804Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2012.Kaynakça (s. 51-64) var.xiii, 88 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm.Yapılan bu çalışma ile ?(1,3) glukanaz geni SacI kesim enzimiyle kesilerek, pETG11(pUC18+?(1,3) glukanaz) rekombinant vektöründen saflaştırma yöntemiyle elde edilmiştir. Daha sonra SacI kesim enzimiyle kesilen pRS416 vektörüne aktarılarak rekombinant vektör oluşturulmuştur. Yeni oluşturulan vektör ise pRS416G olarak isimlendirilmiş ve maya (Saccharomyces cerevisiae) için replikatif vektör geliştirilmiştir. Bundan sonra da pRS416G rekombinant vektörü elektroporasyonla Saccharomyces cerevisiae’ye transfer edilmiştir. Rekombinant Saccharomyces cerevisiae/pRS416G DNA’sının kalıp olarak kullanıldığı PCR reaksiyonu, %0.8’lik agaroz jelde incelenmiş ve yaklaşık 1.9 kbç büyüklüğündeki ?(1,3) glukanaz genine ait DNA bandı görüntülenmiştir. Ayrıca zymogram analizi sonucunda, rekombinant mayada ?(1,3) glukanaz geninin çalıştığını ifade eden sarı zon görüntülenmiştir.In this study, ?(1,3) glucanase gene was digested by Sacl restriction enzyme and obtained by purification from pETG11(pUC18+?(1,3) glucanase recombinant vector. It was then transfered to the pRS416 vector which was digested by Sacl restriction enzyme and recombinant vector was constructed. The new vector is called pRS416G, and a replicative vector was also developed for the yeast (Saccharomyces cerevisiae). After that pRS416G recombinant vector was transferred to Saccharomyces cerevisiae using electroporation. The PCR reaction, used as a template by DNA of recombinant Saccharomyces cerevisiae/pRS416G, was studied in agarose gel of 0.8%, and a DNA band of ?(1,3) glucanase gen, approximately 1.9 kbp in size, was observed. In addition, the yellow zone was observed in recombinant yeast as a result of zymogram analysis, suggesting that ?(1,3) gene functions.Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: SÜF2010YL20