Pektin metilesterazın siyah havuçtan izola edilmesi, saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi

TEZ6936Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2008.Kaynakça (s.35-42) var.vii, 43 s. : rnk.res. ; 29 cm.This research was undertaken to determine some of the biochemical properties (substate specificity, optimum pH, optimum temperature, effect of salts, thermal stability and inactivation) of pectin methylesterase isolated from black carrot and partially purified by 80% ammonium sulphate precipitation followed by dialysis. Km and Vmax values of the enzyme using apple pectin as substrate were 2.14 mg/ml (r2=0.988) and 3.75 unit/ml respectively. The optimum pH for PME activity was found to be 7.5 and the enzyme showed high activity over a broad pH range of 6.0-8.5. The optimum temperature for PME activity was 55°C, after which enzyme activity dropped sharply. Enzyme activity was more than 80% between 50-60°C. The enzyme was very stabile between 30-50°C and the stability declined after 50°C. According to thermal inactivation studies kD values increased as the temperature incresed whereas half-life and D values decreased. Energy of activation (Ea) and Z values were found to be 196.8 kJmol-1 (r2=0.9957) and 2.16ºC (r2=0.9945), respectively. As the Z value indicates the enzyme is not very thermostabile.Bu çalısmada, siyah havuçtan izole edilen ve %80'lik amonyum sülfat çökeltmesi ve diyalizle kısmen saflastırılan pektin metilesterazın substrat ilgisi, optimum sıcaklık, optimum pH, tuzların etkisi, termal stabilite ve inaktivasyon gibi biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi arastırılmıstır. Elma pektiniyle yapılan çalısmada enzimin Km değeri 2.14 mg/ml (r2=0.988) ve Vmax değeri 3.75 ünite/ml olarak bulunmustur. PME aktivitesi için optimum pH değeri 7.5'tir ve enzim 6.0-8.5 gibi genis bir pH aralığında yüksek aktivite göstermistir. PME aktitesi için optimum sıcaklık 55°C olarak bulunmustur ve enzim aktivitesinde bu sıcaklıktan sonra keskin düsüsler görülmüstür. Enzim 50-60°C arasında %80'in üzerinde aktivite göstermistir. Enzim 30-50°C aralığında oldukça stabildir ve 50°C'den itibaren enzim aktivitesi düsmüstür. Enzimin termal inaktivasyon sonuçlarına göre sıcaklık arttıkça kD değerleri azalmıs buna karsılık yarılanma ömrü ve D değerleri ise azalmıstır. Enzimin aktivasyon enerjisi (Ea) ve Z değerleri sırasıyla 196.8 kJmol-1 (r2=0.9957) ve 2.16ºC (r2=0.9945) olarak bulunmustur. Z değerinin de gösterdiği gibi enzimin termal stabilitesi çok yüksek değildir.Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi Tarafından Desteklenmiştir. Proje No:ZF2006YL8