Determinación del potencial inhibitorio de la fracción alcaloidal de Palicourea amethystina sobre xantinoxidasa y radical superóxido mediante autografía.

El objetivo de la investigación fue determinar la actividad inhibitoria de xantina oxidasa (XO) y radical superóxido (RSO) por parte del extracto alcaloideo de Palicourea amethystina (perteneciente a la familia Rubiaceae) mediante autografía. Al realizar la maceración con metanol del material vegetal se obtuvo el extracto bruto líquido, el cual se sometió a una extracción liquido-liquido con cambios de pH para obtener el extracto alcaloideo, mismo que reporto 0.05% de rendimiento de extracción de alcaloides. Para los diferentes métodos autográficos se utilizaron como soporte placas de Cromatografía de capa fina (TLC), en las cuales se sembraron muestras del extracto alcaloideo de Palicourea amethystina a diferentes concentraciones (1 µg, 5 µg, 10 µg, 50 µg y 100 µg) mediante la técnica “dot blot”. Para evaluar la actividad antioxidante se empleó el método 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) utilizando ácido ascórbico como estándar, y para la actividad captadora de radical superóxido se desarrollaron dos métodos: el primero comprende riboflavina (B2), nitroazul de tetrazolio (NBT) y luz; el segundo implica nicotinamida adenina dinucleótido reducido (NAD H), nitroazul de tetrazolio (NBT) y metosulfato de fenazina (PMS); siendo taxifolina el estándar para los dos métodos. Por otra parte para evaluar la actividad inhibitoria enzimática se utilizó: solución Stock enzima XO, buffer (PBS), NBT; como sustrato: xantina, solución buffer de fosfato y dimetilsúlfóxido (mejorar la solubilidad 0.025%) y como estándar se usó alopurinol. Los resultados para la actividad antioxidante y radical superóxido dieron positivo, sin embargo, no exhibe una actividad inhibitoria sobre xantina oxidasa. El aporte que representa esta investigación para la especie Palicourea amethystina es de gran relevancia, debido a la escasa información que existe actualmente. Se recomienda realizar estudios cromatográficos más específicos para identificar el tipo de alcaloides que posee la especie.The objective of the investigation was to determine the inhibitory activity of xanthine oxidase (XO) and superoxide radical (RSO) by the alkaloid extract of Palicourea amethystina (belonging to the Rubiaceae family) by autography. When carrying out the methanol maceration of the plant material, the crude liquid extract was obtained, which was subjected to liquid-liquid extraction with pH changes to obtain the alkaloid extract, which reported a 0.05% yield of alkaloid extraction. For the different autograph methods, thin layer chromatography (TLC) plates were used as support, in which samples of the alkaloid extract of Palicourea amethystina were seeded at different concentrations (1 µg, 5 µg, 10 µg, 50 µg, and 100 µg) using the "dot blot" technique. To evaluate the antioxidant activity, the 2,2-diphenyl-1- picrilhydrazil (DPPH) method was used using ascorbic acid as standard, and for the superoxide radical scavenging activity two methods were developed: the first comprises riboflavin (B2), nitro blue tetrazolium (NBT) and light; the second involves reduced nicotine adenine dinucleotide (NAD H), tetrazolium nitro blue (NBT) and phenazine methosulfate (PMS); taxifoline being the standard for both methods. On the other hand to evaluate the enzyme inhibitory activity was used: Stock enzyme solution XO, buffer (PBS), NBT; as substrate: xanthine, phosphate and dimethylsulfoxide buffer solution (improve 0.025% solubility) and allopurinol were used as standard. The results for antioxidant activity and superoxide radical were positive, however, it does not exhibit an inhibitory activity on xanthine oxidase. The contribution that this research represents for the species Palicourea amethystina is of great relevance, due to the lack of information that currently exists. It is recommended to perform more specific chromatographic studies to identify the type of alkaloids that the species possesses