Metallothionein detection in polyacrylamide gel by electrophoresis

Metalotioneini (MT) su mali peptidi prisutni u stanicama mnogih organizama. Zbog male molekulske mase i specifične strukture, koju čini jedan polipeptidni lanac bogat cisteinom i metalni ioni vezani u njegovom središtu, njihova detekcija i kvantifikacija predstavljaju izazov. Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu je jednostavna i dostupna metoda za određivanje proteina kompleksnih bioloških uzoraka. Pruža mogućnost optimizacije uvjeta u kojima se izvodi, čime se omogućuje razdvajanje i vrlo malih proteina. Cilj ovog rada je pronaći najbolje uvjete za određivanje metalotioneina u uzorcima tkiva gujavica (Lumbricus terrestris) elektroforezom u poliakrilamidnom gelu. Eksperimentalno je provjeren utjecaj različitih čimbenika na uspješnost elektroforetskog razdvajanja metalotioneina, kao što su: različita priprema uzoraka, koncentracija poliakrilamidnog gela, derivatizacija uzoraka monobromobimanom (mBBr) te puferski sustavi u kojima se elektroforeza izvodi. Iako je elektroforezom u poliakrilamidnom gelu moguće detektirati MT, prethodno pročišćavanje i frakcioniranje uzoraka nužno je za uspješnu analizu.Metallothioneins (MTs) are small peptides found in cells of wide range of living organisms. Their detection and quantification present challenge owing to their small molecular mass and specific structure. MTs structure is simple, consisted of one polypeptide chain rich in cysteine, and metal ions bound in the center of that chain. Electrophoresis in polyacrylamide gel is simple and available method for protein detection in complex biological samples. Since its conditions can be altered and optimized, even very small proteins can be detected by this method. The aim of this paper is to find best conditions for MTs detection in earthworm (Lumbricus terrestris) tissue by electrophoresis in polyacrylamide gel. Many different factors that can affect efficacy of electrophoresis were experimentally verified: different sample preparation, concentration of polyacrylamide gel, samples derivatization with monobromobimane (mBBr) and buffers in electrophoretic system. Although MTs can be detected by electrophoresis in polyacrylamide gel, purification and fractionating of samples are necessary for successful analysis and better results