Investigation on the presence of leptospires in ovaries of hamsters experimentally infected whith Leptospiras interrogans serovar pomona

After inoculating L. interrogans serovar pomona in 75 primiparous hamsters (Mesocricetus auratus), the invasiveness of leptospires into lhe ovaries and lhe ability in causing ovary morphologic alterations were investigated by means of microscopic examination and bacterial isolation. For this purpose, 75 hamsters were inoculated with 0.5 ml of virulent strain containing 30-40 leptospires by the microscopic field and the other 15 hamsters were held as the uninfected controls. Signs and symptoms (prostration, tachypnea, rufled hair, jaundice, and nasal, bucal and perineal hemorrage) were detected in all inoculated animals. The animals were killed in the agonic state of the illness, which were done through 4th and 7th day post inoculation. The ovaries were taken asseptically during the necropsies, thoroughly washed using the sterile phosphate buffered saline, in order to eliminate the possible external contamination. The fresh ovary samples were submitted to the dark field direct microscopic examination. After the formalin fixation, the specimens were stained by means of histopathologic techniques using the Levaditi and Hematoxylin Eosin stains. The ovary smears were also examined by the direct fluorescent antibody technique andlhe bacterial isolation was carried out in the Fletcher’s medium. The dark field direct microscopic examination was found tobe less sensitive in demonstrating the presence of leptospiresin the ovaries. In those specimens stained by the Lcvadititechnique, leptospires were visualized in different ovaryinternal structures, involving the interspace, pellucid zone andin the inner ovules. Through the histopathologic examination,typical morphologic alterations resembling acute infiamatoryprocess were found in 57% of ovaries examined.De 90 hamsters primíparas com 80 a 120 gramas de peso vivo, 75 foram inoculadas com a dose individual de 0,5 ml de estirpe virulenta do sorotipo pomona (30 a 40 leptospiras ativas por campo microscópico, no aumento de 200 vezes) e as 15 remanescentes constituíram o grupo testemunho não infectado. Todos os animais tratados com leptospiras apresentaram os sinais da infecção (prostração, taquipnéia, eriçamento do pelame, icterícia e hemorragias nasal, bucal e perineal) e foram sacrificados por ocasião da fase agônica da doença, situada entre o quarto e o sétimo dia da inoculação. Nesta oportunidade, os ovários foram colhidos em condições assépticas e submetidos à técnica de visualização de leptospiras (exame direto em microscopia de campo escuro, coloração argêntica de Levaditi e reação de imunofluorescência direta), cultivo em meio de Fletcher e exame histopatológico (coloração de hematoxilina e eosina). A ocorrência de uma possível contaminação estabelecida durante a retirada dos ovários foi investigada através da lavagem em solução salina tamponada estéril. As leptospiras foram demonstradas em todos os ovários do grupo de animais experimentalmente inoculados (lavados e não lavados), através da coloração de Levaditi, reação imunofluorescência direta e também no cultivo em meio de Fletcher. O exame direto em microscopia de campo escuro mostrou ser uma técnica muito pouco sensível. O exame das preparações submetidas à coloração argêntica possibilitou a visualização de leptospiras em diferentes estruturas dos ovários, incluindo: o interstício, a zona pelúcida e o interior dos óvulos. Os exames histopatológicos permitiram observar as alterações morfológicas típicas de um processo inflamatório agudo em 57% dos ovários examinados