РЕОРГАНИЗАЦИЯ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ АДГЕЗИОННЫХ КОНТАКТОВ И ПОЯВЛЕНИЕ МИГРАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ У КЛЕТОК MCF-7-SNAI1 ПРИ ИНДУКЦИИ ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕЗЕНХИМАЛЬНОГО ПЕРЕХОДА

Using DIC and confocal microscopy, changes in morphology, migratory characteristics and adherence junctions (AJs) were analyzed in the mammary carcinoma cell line MCF-7-SNAI1 after activation of the EMT transcription factor SNAI1. Western Blot analysis showed that after removal of tetracycline from the cell culture medium expression of SNAI1 reached its peak in 24 hours and then plateaued for 7 days. During the 7 days the cells continued to express E-cadherin; however, tangential AJs typical for cells with stable cell-cell adhesion, changed into radial AJs. The radial AJs continued to accumulate E-cadherin during 24‑72 hours after tetracycline removal. As a result of SNAI1 activation, the cells underwent epithelial-mesenchymal transition (EMT) and became migratory. On a two-dimensional substrate, cells exhibited both individual and collective migration. As the tetracycline washout period progressed, the fraction of the cells capable of migrating through migration chamber membranes increased; on the contrary, cells’ ability to invade an epithelial monolayer decreased. These results demonstrate that retaining a hybrid epithelial/mesenchymal phenotype and accumulation of E-cadherin in AJs during early stages of EMT do not impede disruption of stable cell-cell adhesion and cells’ acquisition of migratory activity.С помощью DIC-микроскопии и конфокальной микроскопии были проанализированы изменения морфологии, миграционных характеристик и межклеточных адгезионных контактов в культуре клеток рака молочной железы MCF-7-SNAI1 при активации экспрессии транскрипционного фактора ЭМП – SNAI1. Как показал Вестерн-блот анализ, экспрессия SNAI1 достигала максимальных значений через 24 часа после переноса клеток в среду без тетрациклина и поддерживалась на этом уровне в течение семи дней. В клетках в течение семи дней сохранялась экспрессия Е-кадхерина, при этом тангенциальные межклеточные адгезионные контакты, характерные для клеток со стабильной межклеточной адгезией, замещались радиальными контактами. В радиальных контактах в течение 24–72 часов отмывки от тетрациклина продолжалась аккумуляция Е- кадхерина. В результате активации SNAI1 клетки вступали в ЭМП и приобретали миграционную активность. На двумерном субстрате клетки мигрировали как индивидуально, так и коллективно. С увеличением продолжительности отмывки от тетрациклина повышался процент клеток, мигрировавших через поры в миграционных камерах, способность клеток инвазировать эпителиальный монослой, напротив, снижалась. Полученные данные свидетельствуют о том, что сохранение гибридного эпителиально-мезенхимального фенотипа и аккумуляция Е-кадхерина в межклеточных адгезионных контактах на ранних этапах ЭМП не препятствуют разрушению стабильной межклеточной адгезии и приобретению клетками миграционной активности