Hemocultures for the parasitological diagnosis of human chronic Chagas' disease

With the purpose of standardization of an hemoculture technique presenting a higher positive rate in the parasitological diagnosis of chronic Chagas' disease in patients with reactive serology (IFT, HA, CFT) the following schedule was used. Thirty ml of venous blood was collected with heparin and the plasma was separated by centrifugation (2.000 rpm/30'). The packed cells were washed with LIT medium or PBS which was then removed by centrifugation (2.000 rpm/15'). This material was sampled in 6 screw-tubes 18x200 with 6 ml of LIT medium and incubated at 28°C. These incubated cultures at 28°C were examined after 15, 30, 45 and 60 days. When the hemoculture was not immediately processed after blood collection, the plasma was removed and the sediment enriched with LIT medium and preserved at 4°C. The Xenodiagnosis was performed according to Schenones method used here as a reference technique. Among the various groups of patients examined by both techniques the best results obtained were: 55.08% ofpositivity for hemocultures against 27.5% forxenodiagnosis (X² = 4.54, p = 0.05), with a tubepositivity of 26.6%. Recommendation for screening trials of drug assays is the repetition of method on a same patient 2 or more times in different occasions, as used in xenodiagnosis.Objetivando a padronização de uma técnica de hemoculturas que apresente maior taxa de positividade no diagnóstico da fase crônica da doença de Chagas em pacientes com sorologia reativa (TIF, HA, RFC) utilizamos o seguinte esquema: o volume de 30ml de sangue foi colhido heparinizado e o plasma separado por centrifugaçao (200 rpm/30'); o sedimento foi lavado com meio LIT ou salina fisiológica tamponada e removido por nova centrifugação (2000 rpm/15); as células sedimentadas foram distribuídas em 6 tubos tipo "screw" 18 x 200 contendo 6,0 ml de meio LIT; as culturas incubadas a 28°C, foram examinadas após 15, 30, 45 e 60 dias; quando a hemocultura não foi processada imediatamente após a colheita de sangue, o plasma foi removido e o sedimento, adicionado de meio LIT, conservado a 4°C; o xenodiagnóstico (Schenone) realizado no mesmo dia da colheita do sangue foi utilizado como técnica de referência. Entre os vários grupos de pacientes examinados, os melhores resultados forneceram uma positividade de 55,0%para hemocultura contra 27,5% de xenodiagnósticos positivos (X² = 4,54; p = 0,05), com positividade/tubo de 26,6%. A conservação do material a 4°C durante 48-72 horas não alterou o percentual de positividade. A positividade dos tubos de hemoculturas mostrou uma redução de 18,0para 7,2% quando o plasma não foi removido logo após a colheita do sangue, e mantidas por 24-48 horas a 4°C antes da técnica ser processada. É provável que isto se deva à ação lítica de imunoglobulinaspresentes no plasma, ou ao potencial macrofágico dos linfócitos. Recomendamos: (a) a realização de duas ou mais hemoculturas do mesmo paciente com a finalidade de aumentar a positividade, principalmente em condições de campo e em áreas onde os pacientes crônicos apresentam baixos níveis de parasitemia; (a) o emprego desta técnica na triagem de pacientes e no controle parasitológico de cura, em ensaios clínico-terapéuticos; (c) a execução deste método em outros laboratórios com a finalidade de comprovara viabilidade de seu emprego no diagnóstico de rotina utilizando o meio LIT ou Warren