Optimización del ensayo vibriocida colorimétrico para la determinación de anticuerpos séricos contra V. cholerae del serogrupo O139

El título de anticuerpos vibriocidas es reconocido actualmente como el mejor marcador de inmunidad protectora ante la infección con Vibrio cholerae. Su evaluación permite estudiar la efectividad de vacunas durante ensayos preclínicos y clínicos, a través de la determinación de la funcionalidad de anticuerpos séricos, capaces de lisar células en presencia de complemento exógeno. Se han desarrollado distintos ensayos bactericidas con puntos finales y métodos de determinación del título vibriocida diferentes. La presencia de cápsula en el serogrupo O139 de Vibrio cholerae constituye un impedimento para la lisis eficiente de las células bajo condiciones del ensayo vibriocida utilizado en cepas del serogrupo O1. Por tal razón, se hace necesario adaptar los ensayos bactericidas existentes para V. cholerae O1, con la finalidad de utilizarlos con el serogrupo O139. A partir de un ensayo vibriocida colorimétrico, desarrollado para el serogrupo O1, se optimizaron las condiciones necesarias para una eficiente lisis celular del serogrupo O139 por anticuerpos específicos y el complemento. Este método colorimétrico tiene la ventaja que mediante la adición de glucosa y un indicador de pH al medio de cultivo utilizado para el crecimiento de las células sobrevivientes, puede determinarse visualmente el título de forma clara e inequívoca. Los mejores resultados se obtuvieron después del crecimiento de la cepa diana en cuñas de agar LB, al usar una concentración inicial de vibrión diana de 106 UFC/mL, una concentración inicial del complemento de 100 %, disolución salina fisiológica como diluente y tiempo de reacción de vibriolisis de una hora. Estas condiciones de experimentación permitieron obtener resultados exactos y precisos para V. cholerae O139