Kloning gen Pab pengkode antigen 38 kDa Mycobacterium tuberculosis sebagai kit diagnostik tuberkulosis laten

Diketahui bahwa antigen 38 kDa dari M.tuberculosis memiliki respons sangat immunodominan terhadap sel B dan sel T. Antigen 38 kDa spesifik pula pada M.tuberculosis complex dan bersifat sangat immunogenik, sehingga berpotensi untuk dikembangkan menjadi alat deteksi tuberkulosis melalui kulit. Penelitian ini bertujuan untuk mengkloning gen Pab dari M.tuberculosis yang akan menjadi dasar untuk pengembangan kit diagnosis TB laten berbasis imunologi.Saat ini deteksi TB laten masih dilakukan dengan uji tuberculin skin test (TST). Prinsip uji tuberkulin adalah timbulnya hipersensitivitas pada seseorang yang terinfeksi M. tuberculosis terhadap komponen tuberkulin yaitu purified protein derivative (PPD). PPD mengandung kurang lebih 200 antigen mikobakteri, sehingga uji tuberkulin mempunyai keterbatasan. Misalnya terjadi reaksi positif palsu karena reaksi silang antara PPD dan antibodi yang dihasilkan oleh vaksinasi BCG atau infeksi dengan mikobakteria bukan TB. Dengan demikian, dibutuhkan reagen diagnostik TB yang dapat mengidentifikasi individu terinfeksi baru dan laten. Penelitian kami sebelumnya tentang pencarian antigen M. tuberculosis yang reaktif terhadap serum penderita tuberkulosis dan kontak sebagai imunodiagnostik tuberkulosis laten telah diperoleh antigen 38 kDa yang dikode oleh gen Pab (protein antigen b).. \ud Tujuan penelitian ini adalah untuk mengkloning gen Pab yang akan menjadi dasar pengembangan kit diagnosis TB laten berbasis imunologi. Metode yang digunakan adalah mengisolasi gen Pab dengan PCR, meligasi ke vektor kloning pGEM-T dan mentransformasi ke sel host E.coli JM 109. Karakterisasi klon rekombinan dilakukan dengan PCR dan sekuensing. Hasil penelitian diperoleh bahwa gen Pab berukuran 1993 bp, dan setelah karakterisasi klon rekombinan diketahui bahwa DNA sisipannya adalah benar gen Pab