Foetal bovine ovarie tissue xenotransplantation: advantages and challenges to preserve gameta's viability and increase genetic gain

The use of foetal bovine ovaries tissue xenograft may allow optimization in utilization of genetic material of animals of high genetic merit even before birth, as in the case of cow death before the end of gestation. By using this tissue, good follicular viability results are expected, since at this stage, the ovaries have a greater reserve of primordial follicles, which are even more tolerant to cryopreservation biotechnologies, such as vitrification. Given the applicability of vitrification and xenotransplantation as methods of preserving the reproductive potential, it is important to study possible genetic alterations resulting from these techniques. The objective of the first article was to evaluate, after in vitro an in vivo (xenograft) culture of foetal bovine ovarie tissue, the morphology and developmental capacity of the preantral follicles, as well as the oxidative stress and the levels of Cell degeneration and tissue apoptosis; and in the second article, to evaluate after vitrification and/or xenograft of foetal bovine ovarie tissue morphological chromosomal changes in tissue cells, in addition to the morphology and developmental capacity of preantral follicles. In vivo cultivation groups (xenograft) were effective in maintaining follicular viability, stimulated moderate follicular development and reduced levels of cells degeneration and reactive oxygen species compared to those in the fresh control group. Tissue recovered after 14 days had higher morphology, adherence, and hemorrhage scores than those undergoing recovery after 7 days. The recovery of fragments after 14 days xenotransplanted, has good results in maintaining the viability of preantral follicles included in bovine fetal ovarian tissue, and provides support for follicular growth. Fragments submitted to vitrification and/or xenotransplantation showed an increase in the number of cells with micronuclei, compared to the fresh control group. The morphology, adherence, and hemorrhage scores between fragments submitted to fresh xenograft and those submitted to vitrification prior to xenograft were similar. Follicular reserve was maintained, however, xenotransplantation and vitrification are able to generate structure DNA damages in the ovarian tissue cells of bovine fetuses.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorTese (Doutorado)A utilização do xenotransplante de tecido ovariano fetal bovino pode permitir a otimização do aproveitamento do material genético de animais de alto valor zootécnico antes mesmo do seu nascimento, como em casos de morte da vaca prenhe no final da gestação. Ao utilizar esse tecido espera-se bons resultados de viabilidade folicular, pois nessa fase, os ovários possuem maior reserva de folículos primordiais, que são mais tolerantes às biotecnologias de criopreservação, como a vitrificação. Tendo em vista a aplicabilidade da vitrificação e do xenotransplante como métodos de preservação do potencial reprodutivo, nota-se a importância de estudar possíveis alterações genéticas decorrentes dessas técnicas. Objetivou-se, no primeiro artigo, após cultivo in vitro e in vivo (xenotransplante) de tecido ovariano de fetos bovinos, avaliar a morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos pré- antrais, e ainda, o estresse oxidativo e os níveis de degeneração celular e apoptose no tecido, e no segundo artigo, avaliar após vitrificação e/ou xenotransplante de tecido ovariano de fetos bovinos alterações cromossômicas morfológicas nas células teciduais, além da morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos pré-antrais.Grupos de cultivo in vivo (xenotransplante) foram eficientes na manutenção da viabilidade folicular e estimularam desenvolvimento folicular moderado além de apresentarem redução dos níveis de degeneração celular e de espécies reativas de oxigênio, comparado àqueles do grupo controle fresco. O tecido recuperado após 14 dias apresentou maiores escores de morfologia, aderência e hemorragia do que aqueles submetidos a recuperação após 7 dias. A recuperação de fragmentos após 14 dias xenotransplantados, apresenta bons resultados na manutenção da viabilidade de folículos préantrais inclusos em tecido ovariano fetal bovino, e fornece suporte ao crescimento folicular. Fragmentos submetidos a vitrificação e/ou xenotransplante apresentaram maior quantidade de células com micronúcleos, comparados ao grupo controle fresco. Os escores de morfologia, aderência e hemorragia entre os fragmentos submetidos a xenotransplante a fresco e aqueles submetidos ao vitrificação anterior ao xenotransplante foram semelhantes. Houve manutenção da reserva folicular, entretanto, o xenotransplante e a vitrificação são capazes de gerar danos a estrutura do DNA em células do tecido ovariano de fetos bovinos.2021-09-3