Bazı Bacillus izolatlarında alfa-L-fkosidaz aktivitesinin incelenmesi, enzimin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

Çalışmamızda “Biyomühendislik Bölümü Kültür Koleksiyonu”nda yer alan 100 adet mezofilik Bacillus izolatı ve 60 adet endospor içeren termofilik izolat ile Bacillus cereus, B.subtilis, B.licheniformis NRRL-1001, B.circulans NRRL B-381, B.circulans NRRL B-378, Paenibacillus illinoisensis NRRL NRS-1356, Geobacillus stearothermophilus NRRL-1102 türlerinde α-L-fukosidaz enzim aktivitesi incelenmiştir. Temel karbon kaynağı olarak PGM (porcine gastric mucin) içeren sıvı kültür ortamında mezofilik izolatlar 300C’de 72 saat, termofilik izolatlar 650C’de 48 saat inkube edildikten sonra aktivite tayini mezofilik izolatlarda 370C’de, termofilik izolatlarda ise hem 370C, hem de 650C’de ayrı ayrı gerçekleştirilmiştir. Buna göre, taranan 106 adet mezofilik suş ve izolatın %77,36’sında ve 61 adet termofilik suş ve izolatın %88,5’inde α-L-fukosidaz aktivitesi belirlenmiştir. Elde edilen verilere göre izolatlardan en yüksek aktivite veren mezofilik Bacillus Ege.B.1.d.10 ve termofilik 43 nolu izolat, ölçek büyütülerek derin kültür fermentasyon yöntemiyle üretilmiştir. Her iki organizma için fermentasyon sıvısındaki α-L-fukosidazın kısmi saflaştırılması amacıyla santrifügasyon, ultrafiltrasyon, amonyum sülfat ile çöktürme, diyaliz ve jel filtrasyon kromatografi yapılmıştır. Enzimlerin moleküler ağırlıkları SDS-PAGE ile gösterilmiştir Her bir saflaştırma basamağında total aktivite, total protein, spesifik aktivite ve verim hesaplanmıştır. Ayrıca farklı pH ve sıcaklık aralıklarındaki enzim stabilitesi de saptanmıştır