The relationship between radiation-induced apoptosis in rat germ cells and amifostine

Amaç: Testis dokusu, iyonizan radyasyona en yoğun apoptotik yanıt veren dokulardan biridir. Amifostin kanser ilaçları ve radyasyonun yan etkilerini önleyen bir ajandır. Bu çalışmada amifostinin, radyasyona maruziyet sonucu sıçanların testiküler germ hücrelerinde meydana gelen apoptotik ölümler üzerindeki etkisi TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick and labelling assay) yöntemi kullanarak değerlendirilmiştir. Gereç ve Yöntemler: Ortalama ağırlıkları 250 gr olan 34 adet erişkin Sprague-Dawley cinsi erkek sıçan çalışma gruplarında 12'şer adet, kontrol grubunda 10 adet olmak üzere toplam 3 gruba ayrılmıştır. Radyasyon Theratron 780-C Co60 teleterapi cihazı ile tüm batın ve testislere 2 Gy olarak verilmiştir. Birinci gruptaki sıçanlara sadece radyasyon, ikinci gruptaki sıçanlara radyasyondan 15 dk. önce 200 mg/m2 amifostin intraperitoneal olarak uygulanmış, kontrol grubundaki sıçanlara ise ne radyasyon ne de amifostin uygulanmıştır. Sıçanlar radyasyondan 10 hafta sonra histolojik ve immun-histokimyasal değerlendirme için sakrifiye edilmiştir. Apoptozun saptanmasında TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-X nick end labelling assay) yöntemi kullanılmıştır. Histolojik değerlendirmelerin ardından Apoptotik İndeks (Aİ) yüzdeleri, hazırlanan her bir kesitte rastgele odaklanan 10 ayrı seminifer tübülün değerlendirilmesiyle elde edilmiştir. Bulgular: Kontrol grubundaki normal seminifer tübüllerde düşük oranlarda gözlenen apoptoz, spontan apoptoz olarak değerlendirilmiş olup bu grupta ortalama Aİ oranı %1.8'dir. Radyasyon verilmesinden on hafta geçmiş olmasına rağmen 2 Gy sonrasında her iki çalışma grubunda da yoğun apoptotik yanıtlar gözlenmiştir. Ortalama Aİ oranları sadece radyasyon uygulanan grupta %42, radyasyon öncesinde amifostin uygulanan grupta %37 olarak hesaplanmış olup iki çalışma grubunun Aİ'leri arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmemiştir. Sonuç: Radyasyondan 15 dk. önce intraperitoneal olarak verilen amifostin, sıçanlarda radyasyonun indüklediği germ hücresi apoptozuna karşı bir koruyuculuk göstermemektedir.Objective: Testicular tissue produces an extensive apoptotic response to irradiation. Amifostine is a chemoprotectant that is used to prevent some of the side effects of chemotherapy (cisplatin) or radiation therapy. The purpose of this study was to evaluate the efficacy of amifostine on radiation-induced apoptosis of testicular germ cells using the TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick and labelling assay) method. Material and Methods: Thirty-four male Sprague-Dawley rats with a median weight of 250 grams were grouped into three groups, comprised of 12 rats in each of 2 study groups and 10 rats in a control group. Irradiation was applied with a Theratron 780-C Co60 teletherapy machine. A single fraction of 2 Gy was given to the whole abdomen and testes. The first group received 2 Gy radiotherapy alone, while the second group received 200 mg/m2 amifostin intraperitoneally 15 minutes prior to irradiation. The control group received neither radiation nor amifostine. The rats were sacrificed 10 weeks after irradiation for immunohistological evaluation. TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick and labelling assay) was used to identify apoptosis. Apoptotic indices (AI) were obtained by evaluating ten separate seminiferous tubules on each slide randomly. Results: A low rate of AI (1.8%) observed in the control group was evaluated as spontaneous apoptosis. Although the interval after irradiation was 10 weeks, both groups receiving 2 Gy exhibited intense apoptotic responses. The mean AI was 42% in the radiation alone group and 37% in the radiation plus amifostine group. There was no statistically significant difference between the AI's of the study groups. Conclusion: Intraperitoneal administration of amifostine, 15 minutes prior to irradiation, did not prevent radiation-induced germ cell apoptosis in rats