Bacillus izolatlarının fibrinolitik enzim aktivitesi yönünden taranması ve enzimin kısmi karakterizasyonu

Çalışmamızda çeşitli kaynaklardan yapılan izolasyon çalışmaları sonunda oluşturulan “Biyomühendislik Bölümü Kültür Koleksiyonunda” yer alan 150 adet mezofilik Bacillus izolatında, 60 adet endospor içeren termofilik bakteri izolatında ve Geobacillus stearothermophilus NRRL B-1102 türünde fibrinolitik enzim aktivitesi taranmıştır. Tarama prosesi, içerisinde fibrin oluşturulan katı besiyerinde berrak zon oluşumuna dayandırılarak yapılmıştır. Daha sonra, substrat olarak dekstrin ve soya unu içeren sıvı kültür ortamında 300C’de 72 saat inkubasyonun ardından aktivite tayini 300C’de gerçekleştirilmiştir. Buna göre, petri plağında taranan 150 adet mezofilik suş ve izolatın % 14’ ünde fibrinolitik enzim aktivitesi belirlenmiş, 61 adet termofilik suş ve izolatın hiçbirisinde fibrinolitik enzim aktivitesi saptanamamıştır. Bu veriler ışığında suşlardan en yüksek aktivite ve termostabil enzime sahip olan mezofilik Bacillus sp. Ege B.2d.1 izolatından 5 L’lik karıştırmalı tank reaktörde kesikli kültür yöntemiyle enzim üretimi yapılmıştır. Üretimden sonra, fermentasyon sıvısındaki fibrinolitik enzimin saflaştırılması; santrifügasyon, ultrafiltrasyon, amonyum sülfat ile çöktürme, diyaliz, jel filtrasyon kromatografi yöntemleri ile yapılmış ve saflık ölçümü her adımda enzim aktivitesi, total aktivite, protein miktarı, spesifik aktivite ve verim hesaplanmasıyla belirlenmiştir. Kısmi olarak saflaştırılan enzimin moleküler ağırlığı SDS-PAGE ile gösterilmiştir. Ardından, enzimin farklı sıcaklık ve pH’lardaki stabiliteleri ve plazminojen aktivatörü özelliğinin belirlenmesi ile kısmi karakterizasyonu yapılmıştır