Antifungal potential of the green propolis extract against yeasts of the genus Candida.

Nos últimos anos houve um aumento na incidência de infecções fúngicas por espécies de Candida, gerando um grave problema de saúde pública. A Candidíase é uma infecção oportunista que produz lesões de superficiais a invasivas, onde o uso de fármacos de modo empírico produz resistência nas cepas, tornando difícil o tratamento e fazendo-se necessário à escolha de novas opções terapêuticas, na qual a própolis devido às inúmeras características biológicas tem um futuro farmacológico. Assim, objetivou-se avaliar o potencial antifúngico do extrato hidroalcoólico de própolis verde frente a leveduras do gênero Candida, por dois métodos de detecção de susceptibilidade. Foram utilizadas na pesquisa seis espécies de Candida ATCC, que foram gentilmente cedidas pela Fundação Oswaldo Cruz, RJ, Brasil. Inicialmente, as isoladas foram reativadas em Ágar Sabouroud Dextrose por 72 horas e posteriormente foram testadas quanto o perfil de susceptibilidade frente ao extrato hidroalcoólico de própolis verde e ao fluconazol pelos métodos de referência de difusão em disco (M44-A2) e de microdiluição em caldo (M27-A3) do CLSI. As espécies de Candida foram consideradas como sensível, sensível dose-dependente e resistente, onde foi-se levado em consideração para ambos os testes os breakpoints de ≤ 62,5, 125-250 e ≥ 500 μg/ml para o extrato hidroalcoólico de própolis verde e ≤ 8, 16-32 e ≥ 64 μg/ml para o fluconazol, respectivamente. Em ambos os testes se foi considerado 50% de inibição para o extrato hidroalcoólico de própolis verde em relação ao fluconazol. Todos os isolados reativados mostraram-se viáveis para determinação da susceptibilidade, onde em relação ao teste de difusão em disco frente ao extrato de própolis verde, todas os isolados foram sensíveis dose dependente frente ao disco com concentração de 500 μg/ml. Frente ao fluconazol, apenas C. tropicalis foi sensível, as demais apresentaram resistência, ambos frente ao disco com concentração de 64 μg/ml. Diante da metodologia de microdiluição, frente ao extrato hidroalcoólico de própolis verde, os isolados sensíveis foram os isolados do complexo parapsilosis, a C. tropicalis (CIM e CFM de 15,63 μg/mL) e a C. fumata (CIM e CFM de 62,5 μg/mL); C. albicans apresentou sensibilidade dose dependente (CIM e CFM de 125 μg/mL). Já frente ao fluconazol, apenas a C. tropicalis mostrou-se sensível com uma CIM e CFM de 8 μg/mL, os isolados do complexo parapsilosis apresentaram-se como sensível dose dependente com uma CIM e CFM de 32 μg/mL e as demais apresentaram resistência com uma CIM e CFM de 64 μg/mL, não podendo se determinar a CFM. Comparando as metodologias apenas a C. fumata de comportou de modo semelhante frente as substâncias. Pode-se concluir que o extrato em questão, apresentou uma considerável atividade antifúngica frente aos microrganismos avaliados, isto deve-se a presença dos compostos fenólicos detectados pela CLAE, como o ácido 2,5 dihidroxibenzoico, ácido cafeico, catequina, miricetina e rutina; ambos os testes foram eficazes para determinar a atividade antifúngica das substâncias, no entanto, o microdiluição, é mais confiável para detectar a de extratos naturais, devido os mecanismos de penetração dos compostos secundários presentes no extrato serem melhor distribuídos na técnica de diluição.In recent years, there has been an increase in the incidence of fungal infections by species of Candida, generating a serious public health problem. Candidiasis is an opportunistic infection that produces lesions from superficial to invasive, where the use of drugs empirically produces resistance in the strains, making treatment difficult and making it necessary to choose new therapeutic options, in which propolis due to innumerable biological characteristics has a pharmacological future. Thus, the objective was to evaluate the antifungal potential of the hydroalcoholic extract of green propolis against yeasts of the genus Candida, by two methods of detection of susceptibility. Six species of Candida ATCC were used in the research, which were kindly provided by the Oswaldo Cruz Foundation, RJ, Brazil. Initially, the isolates reactivated in Sabouraud Dextrose Agar for 72 hours and subsequently the susceptibility profile of the green propolis hydroalcoholic extract and fluconazole, tested by disc diffusion reference methods (M44-A2) and microdilution in broth (M27-A3) of the CLSI. Candida species were considered as sensitive, dose-dependent and resistant sensitive, where the breakpoints of ≤ 62.5, 125-250 and ≥ 500 μg / ml were taken into account for both tests for the hydroalcoholic extract of propolis green and ≤ 8, 16-32 and ≥ 64 μg / ml for fluconazole, respectively. In both tests, 50% inhibition considered for the hydroalcoholic extract of green propolis in relation to fluconazole. All the reactivated isolates were feasible for determination of susceptibility, where, in relation to the disc diffusion test against the green propolis extract, all the isolates were dose-dependent at the concentration of 500 μg / ml. In contrast to fluconazole, only C. tropicalis was sensitive, the others presented resistance, both in front of the disc with a concentration of 64 μg/ml. In view of the microdilution methodology, the isolates of the parapsilosis complex, C. tropicalis (CIM and CFM of 15.63 μg / mL) and C. fumata (CIM and CFM of 62.5 μg/mL); C. albicans presented dose-dependent sensitivity (MIC and CFM of 125 μg/mL). In contrast to fluconazole, only C. tropicalis was sensitive with a MIC and CFM of 8 μg/mL, the isolates of the parapsilosis complex were sensitive as a dose-dependent dose with a MIC and CFM of 32 μg/mL and the others showed resistance with an MIC e CFM of 64 μg/mL, and CFM may not be determined. Comparing the methodologies only to C. fumata behaved in a similar way against the substances. It may be concluded that the extract in question had a considerable antifungal activity, against the evaluated microorganisms, due to the presence of phenolic compounds detected by HPLC, such as 2,5-dihydroxybenzoic acid, caffeic acid, catechin, myricetin and rutin; both tests were effective in determining the antifungal activity of the substances, however, microdilution is more reliable to detect the natural extracts, because the penetration mechanisms of the secondary compounds present in the extract are better distributed in the dilution technique