Análise da expressão e do padrão de metilação dos genes p15INK4B E p16INK4A e seus reguladores BMI-1, MYC E TBX2 em tumores mamários caninos.

Ministério da Educação, Universidade Federal Rural da Amazônia, Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Pará e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico.O câncer é uma doença complexa decorrente do acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas no controle e na atividade de vários genes, em especial aqueles envolvidos nos processos de diferenciação e crescimento levando a uma proliferação celular anormal. Esta doença entre os animais de companhia, principalmente os caninos, vem crescendo ao longo dos anos. A neoplasia mais freqüente nas fêmeas caninas é a de mama, sendo responsável por 50% de todas as neoplasias que acometem esses animais. Dentre os genes comumente alterados, estão os reguladores do ciclo celular. Várias famílias de genes sofrem alteração, dentre elas, a família CKI, da qual fazem parte pl5INK4b e pl6INK4a. Sabe-se que a expressão destes dois genes é regulada negativamente pelos produtos proteicos dos genes BMI-1, MYC e TBX2, sendo que alterações nestes podem levar, então, ao câncer. Dessa forma, o objetivo do nosso trabalho, foi avaliar o padrão de metilação e expressão dos cinco genes supracitados em tumores mamários caninos de cadelas da região de Belém, Pará. Oitenta e cinco amostras de tecido neoplásico e não-neoplásico, provenientes de 40 animais, foram coletadas no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural da Amazônia. Para a análise do padrão de metilação, após a extração de DNA, as amostras foram convertidas por ação do bissulfito de sódio e submetidas à técnica de Bissulfite sequence PCR para detecção das possíveis áreas metiladas. Para a análise da expressão de RNA, foi feita a conversão a cDNA e posterior quantificação dos transcritos usando a técnica de PCR quantitativa. A emissão da fluorescência foi captada com o auxílio do ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. BMI-1, MYC e pl6INK4a não apresentaram alteração no padrão de metilação nem na expressão. TBX2 apresentou uma leve diminuição nos dados de expressão, enquanto que pl5INK4b apresentou um aumento, porém, em ambos os casos, tais alterações não apresentaram correlações estatisticamente significativas com os dados clinicopatológicos analisados. Dessa forma, os genes MYC, BMI-1 e pl6INK4a parecem não ser essenciais para o desencadeamento do câncer de mama em caninos, sugerindo que pl5INK4b e TBX2 podem ser regulados por outros mecanismos genéticos e epigenéticos, necessitando de mais estudos para confirmação.Câncer is a complex disease resulting from the accumulation of genetic and epigenetic changes in control and in the activity of several genes, especially those involved in the differentiation and growth processes leading to abnormal cell proliferation. This disease among pets, especially dogs, has been growing over the years. The most common câncer in female dogs is the breast, accounting for 50% of ali cancers that affect these animais. Among the commonly altered genes, are regulators of the cell cycle. Several families of genes undergo change, among them the CKI family, which includes pl5INK4b and pl6INK4a. It is known that the expression of these two genes is negatively regulated by protein products of genes BMI-1, MYC and TXB2, and these changes may lead then to câncer. Thus, the aim of our study was to evaluate the pattern of methylation and expression of above five genes in canine mammary tumors in dogs from the Belém, Pará. Eighty-five samples of tumor tissue and non-neoplastic, from 40 animais were collected at the Veterinary Hospital of the Universidade Federal Rural da Amazônia. For the methylation pattern analysis, after DNA extraction, samples were converted by action of sodium bisulfite and subjected to sequence PCR Bissulfite technique for the detection of methylated possible areas. For the analysis of RNA expression, conversion to cDNA was taken and subsequent quantification of the transcripts using quantitative PCR. The emission of fluorescence was captured with the help of the ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. BMI-1, MYC and pl6INK4a showed no change in methylation pattern or the expression. TXB2 showed a slight decrease in expression data, while pl5INK4b showed an increase, however, in both cases, these changes were not statistically significant correlations with clinicopathological data analyzed. Thus, genes MYC, BMI-1 and pl6INK4a do not seem to be essential for triggering breast câncer in canines, suggesting that pl5INK4b and TXB2 may be regulated by other genetic and epigenetic mechanisms, requiring further study for confirmation