MÉTODO RÁPIDO DE DIAGNÓSTICO DE ROTAVIRUS EN HECES

Los rotavirus humanos (RVH) poseen un genoma de RNA bicatenario, formado por 11 segmentos que presentan una migración electroforética característica para cada cepa. La visualización de los patrones de migración de RNA viral en geles de poliacrilamida (PAGE) se ha vuelto un procedimiento común para la caracterización de las cepas de rotavirus y también como un método diagnóstico de infección viral. El objetivo de este trabajo fue buscar un método rápido de diagnóstico de rotavirus en heces de niños con diarrea aguda, utilizando las técnicas de extracción, separación y tinción descritos por otros autores. El mayor número de muestras positivas a rotavirus se obtuvo con el procedimiento de extracción descrito por Herring et al. (1982), la concentración del RNA viral con etanol absoluto (Sambrook et al., 1989) y la tinción con plata (Herring et al., 1982). La utilización de geles de poliacrilamida al 5% (Chudzio et al., 1989), produjo resultados en menor tiempo. El método descrito resultó de gran especificidad y menor costo que los ensayos inmunoenzimáticos comerciales usados para el diagnóstico de RVH. La sensibilidad del método se probó con especímenes fecales provenientes de niños diarréicos recluidos en la sala de rehidratación del Hospital Universitario “Antonio Patricio de Alcalá” de Cumaná, Venezuela. PALABRAS CLAVES: Rotavirus, Diagnóstico, Electro-foresis. ABSTRACT Human rotaviruses (HRV) possess a double-stranded RNA genome, formed by 11 segments that display a characteristic electrophoretic migrating pattern for each strain. The visualization of these viral RNA migration patterns in polyacrylamide gels (PAGE) has become a common procedure in order to characterize HRV strains, and also a method to diagnose viral infections. The purpose of this work was to look for a rapid method to diagnose rotaviruses in the feces of children with acute diarrhea by using extracting, separating and staining techniques described by other authors. The highest number of rotavirus positive samples was obtained with the extracting procedure described by Herring et al. (1982), the concentration of viral RNA with absolute ethanol (Sambrook et al., 1989), and silver staining (Herring et al., 1982). The use of 5% polyacrylamide gels (Chudzio et al., 1989) produced results in the shortest time. The method described in this paper turned out to be of high specificity and of lower cost than the commercial immunoenzymatic tests used for the diagnosis of HRV. The sensitivity of the method was tested with stools from diarrheic children recluded in the rehydration room of the “Antonio Patricio de Alcalá” University Hospital in Cumaná, Venezuela. KEY WORKS: Rotavirus, Diagnosis, Electrophoresis