Evaluación de la capacidad inmunomoduladora de antígenos de Fasciola hepática : aplicación en la inducción de mecanismos de protección

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019La fasciolosis es una parasitosis causada por el helminto, Fasciola hepatica (F. hepatica), clasificada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como una enfermedad tropical desatendida. Durante su migración en el hospedador definitivo, F. hepatica excreta-secreta numerosos productos, dentro de los cuales se encuentran enzimas pertenecientes a la familia de las catepsinas. Estas cisteín proteasas desempeñan un papel crítico en funciones vitales para la supervivencia del parásito, y a su vez modulan la respuesta inmune del hospedador. Una de las últimas proteasas de esta familia en ser descripta es Catepsina L3 (FhCL3). FhCL3 se expresa durante el estadío juvenil o invasivo del parásito, en el cual realiza el pasaje a través de la pared intestinal. Se ha reportado que FhCL3 presenta una importante actividad colagenolítica que podría facilitar la invasión del parásito a través de los tejidos del hospedador. Por esta razón, FhCL3 sería un factor esencial en el desarrollo de la patología. Sin embargo, no hay información respecto a la interacción de FhCL3 con el sistema inmune. En el presente trabajo se estudió la capacidad de FhCL3 para modular la activación de las células presentadoras de antígenos por excelencia, las células dendríticas (CDs) y su influencia en la respuesta inmune adaptativa. Los resultados obtenidos en esta tesis mostraron que FhCL3 promueve la activación del inflamasoma NLRP3, en ausencia de otros estimuladores como patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs) y/o activadores de NLRP3. Este fenómeno se evidencia por la secreción de cantidades significativas de interleuquina 1 beta (IL-1β) e IL-18 y es dependiente tanto de la actividad enzimática de FhCL3, como de la presencia de NLRP3 e independiente de caspasas 1/11. Además, se comprobó que en la producción de IL-1β inducida por FhCL3, estarían involucrados tanto la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS), como el eflujo de potasio y la acidificación lisosomal. A pesar de la participación de estos eventos conocidos como segunda señal en la activación del NLRP3, este fenómeno ocurriría de manera no canónica, ya que es independiente de NF-κB. Las características de FhCL3 de ser internalizada por las CDs, ubicarse en el citoplasma, su capacidad para escindir la proforma de IL-1β y promover la maduración a su forma biológicamente activa, sugieren una actividad “caspasa-like” dentro de la célula. A su vez, estas CDs condicionadas con FhCL3 presentaron un fenotipo semimaduro y una capacidad para polarizar la respuesta inmune adaptativa tanto in vitro como in vivo, hacia un patrón de expresión de citoquinas singular, caracterizado por la liberación de interferón gamma (IFN-γ) e IL-13. Curiosamente, demostramos que FhCL3 participa en la inducción de una respuesta de IFN-γ durante la infección ya que esplenocitos de animales infectados produjeron niveles significativos de esta citoquina luego del reestímulo con esta proteína. Estos resultados demuestran que FhCL3 tiene la habilidad de activar un componente clave de la inmunidad innata, el inflamasoma NLRP3 y a su vez favorecer el desarrollo de una respuesta inmune adaptativa que podría resultar protectora contra el parásito. Por lo tanto, FhCL3 podría ser utilizada en el desarrollo de estrategias terapéuticas para potenciar mecanismos que incrementen la inflamación con posibles aplicaciones en diversas patologías.202