Efecto del extracto natural de arándono rojo en la formación de un biofilm y en la viabilidad bacteriana en un modelo validado de biofilm oral in vitro

Objetivos Investigaciones previas han demostrado la capacidad antimicrobiana de los extractos de arándano rojo frente a varios patógenos periodontales en estado planctónico. No obstante, la literatura existente sobre ese efecto en patógenos periodontales organizados en biofilm in vitro es escasa. Debido a que las bacterias se organizan en biofilms en la cavidad oral, el objetivo de este estudio es evaluar la actividad antibacteriana y el potencial anti-adhesión para la formación de biofilms del extracto de arándano rojo frente a Streptococcus oralis, Veillonela parvula, Actinomices naeslundii y los patógenos periodontales Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans y Fusobacterium nucleatum, en un modelo validado de biofilm in vitro. Materiales y métodos Se estudiaron las concentraciones mínimas inhibitorias (MICs, por sus siglas en inglés) y las concentraciones mínimas bactericidas (MBCs, por sus siglas en inglés) de 6 especies bacterianas en planctónico, tras un periodo de exposición de 24-48 horas a diferentes concentraciones de extractos de arándano rojo (1.000 μg/mL; 500 μg/mL; 250 μg/mL; 100 μg/mL y 10 μg/mL). Dichas especies bacterianas están implicadas en el desarrollo del biofilm oral subgingival in vivo y, como tal, representan los colonizadores iniciales (S. oralis y A. naeslundii), tempranos (V. parvula), secundarios (F. nucleatum) y los colonizadores tardíos (P. gingivalis y A. actinomycetemcomitans). Teniendo en cuenta las MBCs de las seis especies bacterianas, se utilizó un modelo validado de biofilm in vitro, para evaluar la actividad antibacteriana de una solución de extractos de arándano rojo (20.000 μg/mL), frente a las bacterias organizadas en biofilm, en dos tiempos de exposición (30 y 60 segundos). Teniendo en cuenta las MICs de las seis especies bacterianas, se analizó el potencial inhibitorio en la formación de biofilms sobre discos de XVIII hidroxiapatita (HA), de una solución de extractos de arándano rojo (200 μg/mL), tras 6 horas de contacto. En los tres experimentos, se estudió el recuento de las bacterias, expresadas como unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL), mediante la técnica reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qPCR, por sus siglas en inglés). La vitalidad celular de los biofilms fue evaluada por microscopía de barrido laser confocal (CLSM, por sus siglas en inglés). En el segundo y tercer experimentos, las variables dependientes seleccionadas fueron las UFC/mL viables de las seis bacterianas y la proporción de células vivas/células muertas de todo el biofilm. Se realizó un análisis a nivel del experimento para cada parámetro del estudio (n=9 para qPCR y n=3 para los resultados de CLSM). Para evaluar la normalidad de la distribución de los dados se usó el test de Shapiro-Wilk. El efecto de cada solución y el tiempo de exposición (variables independientes) y su interacción con las variables dependientes, se evaluó mediante el test paramétrico ANOVA. Se construyó un modelo lineal general, utilizándose el método de máxima verosimilitud y las correcciones de Bonferroni para comparaciones múltiples. Los datos se expresaron como medias ± desviación estándar y como el porcentaje medio de inhibición. Los resultados se consideraron estadísticamente significativos con p