KONSTRUKSI EARLY GENE E6 Human papillomavirus (HPV) SEBAGAI PUSTAKA GENETIK HPV TIPE 16

Kanker serviks merupakan salah satu dari empat jenis kanker yang paling sering muncul di dunia dan kasusnya terus meningkat dari tahun ke tahun. Statistik di tingkat dunia menyatakan bahwa pada tahun 2012 muncul kasus kanker serviks baru sebanyak 527.600 kasus, serta terjadi kematian pada 265.700 kasus dan sebanyak 144.400 (54%) kasus diantaranya terjadi di Asia. Peningkatan kasus kanker serviks yang kian mengkhawatirkan dapat disebabkan oleh minimnya langkah pencegahan penyakit ini. Vaksin merupakan agen biologis yang dapat memicu sistem imun sehingga infeksi virus Human papilloma tidak berkembang menjadi kronis dan menimbulka keganasan. Penelitian ini bertujuan untuk menghasilkan pustaka genetik yang dimanfaatkan sebagai kontrol positif dari HPV tipe 16. Penelitian ini dilakukan dengan menerapkan metode PCR, Elektroforesis, Kloning, dan Sekuensing. Dengan menggunakan enzim T4 ligase, produk PCR yang merupakan gen E6 dengan ukuran 678 bp dikloning ke plasmid pJET1.2/blunt. Selanjutnya plasmid yang berisi gen sisipan tersebut ditransformasikan ke dalam sel kompeten (E.coli strain DH5α) dan ditumbuhkan pada media LB padat yang mengandung antibiotik ampisilin dengan konsentrasi 50µg/ml. Koloni terpilih diisolasi dan diperoleh 5 isolat plasmid yang mengandung gen E6. Isolat plasmid di PCR dan dianalisis dengan metode sekuensing. Berdasarkan hasil sekuensing dinyatakan homologi antara produk PCR yang dianalisis dengan data dari GenBank sebesar 99%. Dengan menerapkan metode kloning ini, peneliti mampu menghasilkan pustaka genetik dari salah satu onkogen Human papillomavirus risiko tinggi yaitu gen E6 dari HPV tipe 16