Secuenciación transcriptómica del gen de la sialidasa (SA), de aislados de Trypanosoma rangeli, que tienen y no tienen actividad enzimática

Trypanosoma rangeli (T.r) y Trypanosoma cruzi (T.c), son protozoos parásitos que guardan profundas relaciones biológicas, bioquímicas e inmunológicas. Ambos son encontrados en infecciones mixtas en humanos y presentan reactividad inmunológica cruzada. Por esta razón, los estudios sobre el T. rangeli se han encaminado tanto al desarrollo de herramientas diagnósticas que permitan su diferenciación de T. cruzi, así como al análisis de genes o productos de T. rangeli que sean relevantes dentro del contexto de su asociación con T. cruzi y la relación hospedador-vector. Por mucho tiempo se ha postulado que la infección con T. rangeli puede modificar el curso normal de la infección chagásica. Esto se ha podido comprobar a nivel experimental, en animales infectados o inmunizados con antígenos de T. rangeli. Estos modelos experimentales presentan menores patologías al ser retados con inóculos de T. cruzi. La interacción entre estos parásitos es compleja y a la fecha resta mucho por entender sobre ella. Estudios anteriores han demostrado que T. rangeli expresa una enzima llamada sialidasas (Tersa), la cual no es similar a la trans-sialidasas (TS) encontrada en T. cruzi (Tacs) y a la vez esta, se encuentra prominentemente en el estadio de epimastigotas. Pereira y Moss (1985) informó sobre una "actividad de una neuraminidasa" presente en T. rangeli diferente de una enzima relacionada presente en T. cruzi. Estos autores que trabajan con poblaciones de El Salvador, Costa Rica, Panamá y encontraron que todas las cepas de T. rangeli estudiadas muestran actividad de la neuraminidasa y llegaron a la conclusión de que la liberación de la enzima era probable por un proceso de secreción". Trabajo adicional sobre la sialidasas (SA) ha demostrado que no es una trans sialidasa (TSA) como en T. cruzi (Buschiazzo y col. 1993) y que se expresa prominentemente en la fase epimastigotas. Nuestro proyecto de investigación brindará información sobre las características a nivel de mRNA de aquellos aislados de T. rangeli que tienen y no tienen actividad de sialidasa del gen (SA), en los aislados de T. rangeli, a trabajar. Para este fin, se analizaron 2 aislados de T. rangeli, uno con actividad enzimática de SA y otro sin actividad (suministrados por el C.I.D.E.P). La actividad de sialidasa fue medida mediante la técnica de MU-NANA (Shottelius. J.1987). Se cuantificó, la concentración de RNA total y mRNA de cada producto. Posteriormente, se clonó con en el vector de propagación, pGEM-T Easy (Promega) (Sanbrook J, Russell DW. 2006) y seguidamente Fueron secuenciados por el método de Dideoxi Nucleótidos marcados en el secuenciador automático 3130 genetic Analyzer Sanger 1977 (Applied Biosystem). Los datos fueron depurados, consolidados, analizados y presentados a fin de obtener datos vigentes, para determinar las diferencias en aislados de T. rangeli, que tienen actividad enzimática de SA y las que no. Para el análisis de la similitud de nucleótidos y de aminoácidos (a.a.), de estas secuencias, se utilizó herramientas bioinformáticas tales como Blast en NCBI y EBI. (Marañón y col.2000b y Sanbrook y col. 2001); donde se pudo observar, que nuestros dos aislados, poseen identidad de 99% con el gen precursor de sialidasa utilizada por Alejandro Buschiazzo (Buschiazzo y col 1997) pero presentan diferencias en 4 posiciones de a.a