Subtipificación molecular mediante PFGE y su susceptibilidad a agentes no B-Lactámicos de cepas de Klebsiella Pneumoniae KPC positivas procedentes del Laboratorio Central de Referencia en Salud Pública, Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud, durante el año 2011

Generalidades. Taxonomía e historia de K. pneumoniae. Identificación bioquímica de K. pneumoniae. Características coloniales de K. pneumoniae. Factores de virulencia de K. pneumoniae. Antígenos capsulares. Pilis o fimbrias. Tipo 1 o común. Tipo 3: Resistencia sérica o mediada por lipopolisacáridos (LPS). Sideróforos. Resistencia bacteriana. Resistencias membranales. Porina oprD. Bombas de eflujo. Resistencias mediadas enzimáticamente. Beta-lactamasas de Clase C familia AmpC. Beta-lactamasas de Clase B familia MBL. Beta- lactamasas de Clase D familia OXA. Beta-lactamasas de Clase A familia BLEE y KPC 1. Orígenes de la transmisión de carbapenemasas. Mecanismos combinados diferentes a carbapenemasas. Carbapenemasa de Klebsiella pneumoniae (KPC). Consideraciones técnicas de resistencia. Conceptos de sensibilidad a los antimicrobianos. Clasificación de antimicrobianos. b-lactámicos. No b-lactámicos. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 2.5. Enzimología de la KPC. Epidemiología y diseminación de la KPC. Bases moleculares de la resistencia. Electroforesis en geles de campo pulsante. Identificación fenotípica de resistencia. Identificación fenotípica de resistencia. Antibiótico-terapia en bacterias con múltiple resistencia a antibióticos y KPC. Materiales y Métodos Aspectos metodológicos Materiales e insumos a. Identificación bacteriana b. Determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos por sistema Vitek 2 Compact c. Difusión por Kirby-Bauer d. Test Epsilométrico e. Sinergias cualitativas f. Extracción de ADN g. Reacción en cadena de la polimerasa. Procedimiento de electroforesis en geles de campos pulsantes (PFGE). Procedimiento de inclusión en los plug’s. Inclusión bacteriana en los Plug's. Lisis bacteriana en agarosa. Lavado de los plug's. Cortes con enzimas de restricción. Cargado de los plug’s digeridos enzimáticamente en el gel principal de PFGE. Condiciones de la PFGE. Visualización de Bandas y Análisis de similaridad por patrones. Cálculo de coeficiente de Jaccard y árboles filogenéticos. Metodología de secuenciación MLST. Resultados. Discusión. Conclusiones y recomendaciones. Referencias Bibliográficas. Anexo