Comparación de diferentes sondas de DNA para la detección de Plasmodium falciparum

Probes pRepHind, Rep 20, p242B-1, pPF-14, clone 26 and 34 were compared for their ability to detect P. falciparum in field conditions. Ninety four clinical samples from patients living in the malaria endemic area of Tumaco (Pacific Coast) plus 88 from Villavicencio (Eastern Plains) were tested in "dot-blot" hibridization experiments. Probes Rep 20, p242B 1- 1, pRepHind and pPF-14 detected up to 17 pg of purified P. falciparum DNA, while clone 26 and clone 34 detected up to 425 pg DNA. Probes pPF-14, p242B 1- 1, pRepHind and Rep 20 exhibited comparable detecttion levels of parasites in infected blood samples. Sensitivity declined from 75-94% in subjects with parasitemias higher tan 10.000 par./ul to 15-42% in subjects with parasitemias lower than 100 par.100 par./ul PPF- 14 and p242B 1- 1 showed the highest sensitivity, while clone 26 and 34 presented significantly lower sensitivities. Al1 probes showed to be highly specific. Detection levels are dependent on specimen treatment. Treatment consisting of serum removal, Triton X- 100 lysis, Proteinase K digestion, Phenol and Chloroform extractions followed by Ethanol precipitation yielded 100% sensitivity for specimens with parasite density higher than 1.000 par./ul.Las sondas pRepHind, Rep20, p242B1-1, pPF-14, clon 26 y clon 34 se compararon a fin de examinar su capacidad para detectar P. falciparum en estudios de campo. Noventa y cuatro muestras de pacientes procedentes de Tumaco, región endémica de malaria situada en la Costa Pacífica Colombiana y 78 muestras provenientes de Villavicencio (Llanos Orientales), se estudiaron en experimentos de hibridación en "dot-blot". Las sondas Rep 20, p242B1-1, pRepHind y pPF-14 detectaron hasta 17 pg de DNA purificado de P. falciparum, mientras que los clones 26 y 34 detectaron 425 pg de DNA. Las sondas pPF-14, p242B1-1, pRepHind y Rep 20 mostraron niveles comparables de detección en muestras de sangre infectada. La sensibilidad mostró variaciones desde 75-94% en sujetos con parasitemias mayores de 10.000 par. a 15-42% en sujetos con parasitemias menores de 100 par. .Las sondas pPF-14 y p242B1-1 mostraron la mayor sensibilidad, mientras que los clones 26 y 34 presentaron niveles de detección significativamente menores. Todas las sondas demostraron ser altamente específicas. Los niveles de detección fueron dependientes del tratamiento de la muestra. El tratamiento consiste en eliminación del suero, lisis con Triton X-100, digestión con Proteinasa K, extracción con Fenol y Cloroformo, y precipitación con etanol condujo a niveles de detección del 100% cuando se realizó en muestras con parasitemias igual y/o mayores de 1.000 par