Serodiagnóstico de giardiosis: identificación de inmunoglobulina G anti-Giardia duodenalis en suero mediante ELISA

Diagnosis of Giardia duodenalis infections is based upon identification of cysts or trophozoites in fecal samples. However, sensitivity of parasitological methods reaches a maximum of 85% in multiple samples, due to intermittent excretion of cysts. Presence of antibodies does not distinguish between a recent or a past infection, but they can aid in differential diagnosis. The aim of this study was to standardize and evaluate an immunoenzymatic assay (ELISA) for the detection of anti-Giardia duodenalis IgG antibodies in sera from infected patients. Antigen was prepared from cultured trophozoites initially obtained from the small intestine of gerbils (Meriones unguiculatus) that had been previously infected with cysts purified from positive human fecal samples. Sixty sera from patients with parasitologically demonstrated Giardia infection (positive samples) and 47 sera from umbilical cords (negative samples) were used to standardize and evaluate the test. Anti human IgG linked to alkaline phosphatase was used as conjugate. The optimum concentration of G. duodenalis trophozoite antigen was 15 ug/ml and the optimum dilutions of sera and conjugate were 1 :25 and 1 :400, respectively The cut-off value (absorbance) was 0.300. The pararneters of the test were: sensitivity, 98.3% (95% confidence interval (95%Cl): 89.9%-99.9%); specificity, 95.7% (95% CI: 84.3%-99.3%); positive predictive value, 96.7% (95% CI: 87.6% - 99.4%), and negative predictive value: 97.8% (95% GI: 87.0%-99.9%). The ELlSA test will improve the diagnosis of giardiasis and will be useful for epidemiological studies of seroprevalence.El diagnóstico de la infección por Giardia duodenalis se basa en la identificación de quistes o trofozoítos en materia fecal, alcanzando una sensibilidad máxima de 85% en muestras seriadas, debido a la excreción intermitente de quistes. Aunque la determinación de anticuerpos no permite diferenciar entre una infección pasada y una reciente, si podría ayudar en el diagnóstico diferencial. El presente estudio tuvo como objetivos estandarizar y evaluar una prueba inmunoenzimática (ELISA) para la detección de anticuerpos tipo IgG anti-Giardia duodenalis en sueros de pacientes con la infección. La preparación del antigeno se hizo a partir de trofozoitos cultivados que, inicialmente, fueron obtenidos del intestino de gerbils (Meriones unguiculatus) infectados experimentalmente con quistes purificados a partir de muestras positivas de materia fecal humana. Para la estandarización y evaluación de la prueba, se emplearon 60 sueros de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamente (muestras positivas) y 47 sueros de cordón umbilical recién cortado (muestras negativas). Como conjugado, se utilizó anti-lgG humana ligada a fosfatasa alcalina. La concentración óptima de antígeno de trofozoíto de G. duodenalis fue de 15 ug/ml y las diluciones óptimas de suero y conjugado fueron 1:25 y 1:400, respectivamente. El valor del punto de corte (absorbancia) fue 0,300. Los parámetros de la prueba fueron: sensibilidad, 98,3% (intervalo de confianza de 95% (lC 95%): 89,9%-99,974); especificidad, 957% (IC 95%:84,3%-99,3%); valor predictivo positivo, 96,7% (IC 95%: 87,6%-99,4%), y valor predictivo negativo, 97,8% (IC 95%: 87,0%-99,9%). La prueba ELlSA descrita contribuirá a mejorar el diagnóstico de giardiosis y podrá ser empleada para estudios epidemiológicos de seroprevalencia