Cultivos celulares primarios de Lutzomyia shannoni (Diptera: psychodidae) y estudio cariologico preliminar de la especie

To obtain a Lutzomyia shannoni (Dyar) cell line for viral susceptibility studies and parasite maintainance, primary cell cultures of this species were initiated. This species is a vector for vesicular stomatitis virus in the United States and a suspected vector of cutaneous leishmaniasis in the Americas. Starting with embryos and phlebotominae neonate larvae, embryonic tissue explants in a MMIVP12 medium were carried out. After being supplemented with 20% fetal bovine serum and an antibiotic and antimycotic mixture, they were incubated at 28°C in a non-CO, environment. Cell growth began 85 to 88 days after the cultures were initiated dueto epithelial cell vesicle presence; these were floating in the media or adhered to small fragments of tissue with divided cells. Following mechanical stimulation of the cultures, cell proliferation increased in the week following the procedure; however, cell mitotic process was slow, similar to that developed with Lu. longipalpis, but different to cell cultures derived from mosquitoes. The formation of individual colonies, dispersed on the surface of the culture flasks, was observed 90 days after incubation; these later evolved to a semiconfluent monolayer. The cellular morphology was heterogeneous with predominant epithelial types. Using the squash technique, this species' karyotype was obtained; the number of diploid chromosomes was 8, derived from fourth-instar larvae brain tissue.Con el propósito de obtener una línea celular de Lutzomyia shannoni (Dyar) para estudios de susceptibilidad viral y mantenimiento de parásitos, se iniciaron cultivos celulares primarios de esta especie, vectora del virus de la estomatitis vesicular en los Estados Unidos y vectora sospechosa de leishmaniasis cutánea en las Américas. A partir de embriones y larvas neonatas del flebotomineo, se realizaron explantes de tejidos embrionarios en el medio MMIVP12, suplementado con 20% de suero fetal bovino y una mezcla de antibiótico y antimicótico, los cuales fueron incubados a una temperatura promedio de 2VC, sin atmósfera de CO,. El crecimiento celular comenzó en un periodo de 85 a 88 días después de efectuadas las siembras, mediante la presencia de vesículas compuestas de células epitelioides, flotando en el medio o adheridas a pequeños fragmentos de tejidos con células en división. Previa estimulación mecánica de los cultivos, se incrementó la proliferación celular a la semana siguiente de efectuado el procedimiento; sin embargo, el proceso mitótico de las células fue lento, similar al desarrollado con Lu. longipalpis, pero diferente a los cultivos celulares derivados de mosquitos. La formación de colonias individuales, dispersas en la superficie del frasco de cultivo, se observó a los 90 días de incubación, las cuales posteriormente evolucionaron a una monocapa semiconfluente. La morfología celular fue heterogénea con predominio de tipos epitelioides. Mediante la técnica de squash, se obtuvo el cariotipo de la especie, cuyo número diploide de cromosomas fue de 8, derivados de tejidos cerebrales de larvas de IV estadio