Caracterización de las células T reguladoras por citometría de flujo: estado del arte y controversias

The ability to maintain proper balance between immune activation and inhibition is required to develop an effective immune response without immunopathogenic processes associated. Different effector mechanisms that allow the elimination of exogenous agents and the presence of a regulatory system guarantee the physiological immune response and maintain the tolerance to self antigens.Among the regulatory mechanisms, the function of CD4+ T lymphocytes, in particular, the regulation exerted by natural regulatory T cells (nTreg), is important to underline. The phenotypic and functional characterization of these cells is a complex process, due to the absence of a cell marker that allows their specific identification by flow cytometry, a tool that has made possible the characterization of most of the immune cells.Currently, the combined use of monoclonal antibodies to identify CD4+/CD25high/Foxp3+/CD127low/- T lymphocytes has been proposed as the most specific alternative to determine the frequency of nTreg. For functional analysis, the identification of nTreg based on the expression of FoxP3 is not possible, since this is an intracellular molecule that requires the permeabilization of the cells for their identification. Once the cells are pure, their functional activity could be evaluated by different methods, including measuring their effect on the function of effector T lymphocytes.Based on these limitations the search for new molecules that allow a better characterization of these cells by flow cytometry continues and most likely a combination of this powerful tool with recent molecular findings (FoxP3 gene methylation pattern) will give a more precise alternative to study this cell subpopulation.La habilidad para mantener el equilibrio entre la activación y la inhibición de la respuesta inmune es un requisito necesario para evitar el desarrollo de procesos inmunopatológicos. Esto se logra gracias a la existencia de mecanismos efectores que permiten la eliminación de agentes extraños al organismo y a la presencia de un sistema regulador que limita las respuestas efectoras y mantiene la tolerancia de los antígenos propios.Entre los mecanismos reguladores se destaca la función ejercida por los linfocitos T (LT) CD4+, en particular, por la subpoblación de LT reguladores naturales (nTreg). La caracterización fenotípica y funcional de estas células es compleja, por la ausencia de un marcador que permita su identificación específica por citometría de flujo, herramienta que ha hecho posible la caracterización de la gran mayoría de células del sistema inmune.Actualmente, se propone que el uso combinado de anticuerpos monoclonales que permitan la identificación de LT CD4+/CD25alto/Foxp3+/CD127bajo/- es la alternativa más específica para determinar la frecuencia de estas células. Para estudios funcionales se requiere eliminar, de la combinación anterior; la detección de FoxP3 por ser una molécula intracelular cuya detección requiere la permeabilización celular. Una vez están purificadas las nTreg, la actividad funcional se evalúa por diferentes métodos que, en su mayoría, miden el efecto que tienen sobre la función de los LT efectores