Transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens de suspensiones celulares embriogénicas de banano cultivar Grande naine (AAA)

The black Sigatoka (Mycosphaerella fijiensis Morelet) has become in the last years, the most destructive disease that affects the production of banana and plantains world-wide. The present work was made with the objective to obtain transgenic plants of banana cultivar Grand naine (AAA) resistant to this disease with the use of genetic transformation. Embryogenenic cell suspensions obtained from somatic embryos formed from immature male flowers, were used for the transformation by Agrobacterium tumefaciens. The bacterial strain EHA-105 was used with the binary plasmids pHCA-58, pHCG-59 and pHGA-91, which contain different combinations of genes that encode for the antifungal chitinase, glucanase enzymes and the AP-24 osmotin. The commercial herbicide BASTA® was used as selective agent. One hundred ten putative transformed lines of the three constructions were obtained, after three selection months in the culture medium. The transgenic events were verified by means of Polymerase Chain Reaction analysis.Key words: AP-24, chitinase, glucanase, Musa, Mycosphaerella fijiensisLa Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) se ha convertido en los últimos años, en la enfermedad foliar más destructiva que afecta el cultivo de bananos y plátanos a nivel mundial. El presente trabajo se realizó con el objetivo de obtener plantas transgénicas de banano cultivar Grande naine resistentes a esta enfermedad mediante la transformación genética. Se emplearon suspensiones celulares embriogénicas, obtenidas a partir de embriones somáticos formados de flores masculinas inmaduras, para realizar la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens. Se empleó la cepa EHA-105 de la bacteria con los plásmidos binarios pHCA-58, pHCG-59 y pHGA-91, estos contienen diferentes combinaciones de genes que codifican para las enzimas antifúngicas: quitinasa, glucanasa y la osmotina AP-24. Como marcador de selección fue empleado el herbicida comercial BASTA®. Se obtuvieron 110 posibles líneas transformadas de las tres construcciones, luego de tres meses en medio de cultivo de selección. El evento de transgénesis fue comprobado mediante análisis de reacción en cadena de la polimerasa.Palabras clave: AP-24, glucanasa, Musa, Mycosphaerella fijiensis, quitinas